消化器癌における異常c-kit転写産物の発現と機能解析

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 06807052
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 日野田 祐治 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10165128)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 裕樹 札幌医科大学, 医学部, 助手
• Keywords: c-kit / 大腸癌 / Alternative Promoter

Research Abstract

大腸癌細胞株colo201において見い出した3.5kbの異常転写産物について、Colo201のcDNAライブラリーを作製し、これをc-kit cDNA断片をプローブを用いてスクリーニングを行ない、18の陽性クローンを解析して一次構造を決定した。その結果、本転写産物はc-kitキナーゼドメインのC末端側約1/2のみをコードしており、5'端はイントロン15に一致していた。エクソン16の上流75bpよりORFと考えられ、alternative promoterによる転写であることが推察された。ORFの5'上流にはいくつかの転写制御エレメントに一致する配列(CCAAT,GATA,TRF,TGGCA)が見い出された。本転写産物が蛋白レベルでも発現していることを調べるために、c-kit C末端に対するポリクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーを行った。その結果、permeabilizedの条件下で、Colo201細胞に明らかな反応性を認めた。またウェスタンブロット法でも25kDの位置にバンドを検出しえた。以上の結果から、Colo201細胞においては、何らかの理由でalternative promoter活性が高まり、C端の一部に相当する産物が生じていると考えられた。
本遺伝子の作用を明らかにする目的で、NIH 3T3細胞にトランスフェクションを行ないstable transfectomaを作製したが、細胞増殖に対する明らかな影響は認められなかった。現在、c-kitを過剰発現している細胞株に対する影響を検討中である。

Research Products

• [Publications] Toyota M,Hinoda,Y.et al.: "cDNA cloning and characterization of truncated form of c-kit in human colon carcinoma cells." Cancer Res.54. 272-275 (1994)
• [Publications] Adachi M,Hinoda Y.et al: "Induction of protein-tyrosine phosphatase LC-PTP by IL-2 in human T cells." FEBS Lett.338. 47-52 (1994)
• [Publications] Takekawa M.Hinoda Y.et al.: "Chromosomal localization of the protein tyrosine phosphatase G1 gene and characterization of the aberrant transcripts in human colon cancer cells." FEBS Lett.339. 222-228 (1994)
• [Publications] Isobe M.Hinoda Y.et al.: "Chromosomal localization of an SH2 containing tyrosin phosphatase (SH-PTP3) gene to chromosome 12q24.1." Oncogene. 9. 1751-1753 (1994)