1994 Fiscal Year Annual Research Report

Crk結合リン酸化蛋白質p130の機能解析

Research Project

Project/Area Number	06857014
Research Institution	Jichi Medical University
Principal Investigator	堺隆一自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)
Keywords	Crk / p130 / SH2 / SH3 / チロシンキナーゼ / Src
Research Abstract	v-Crkを発現させたラット3Y1細胞(3Y1-Crk)より、v-Crkと結合するラットp130を抗体カラムにより純化し、部分アミノ酸配列決定によりp130のcDNAをクローニングした。cDNAの構造解析から、p130はSrc homology3(SH3)領域と15個のSH2結合部位の集積する領域を持つ新規の信号伝達分子であることがわかった。このp130蛋白質をCas(Crk-associated Substrate)と命名し、3種類の部分領域に対する抗体を用いた免疫学的解析を行った。その結果、p130は正常の3Y1細胞では115kDと125kDの主として2本のリン酸化チロシンを含まないバンドとして検出されるが、v-Crkまたはv-Srcでトランスフォームした3Y1細胞(3Y1-Crk,SR-3Y1)では強くリン酸化をうけた125kD以上のブロードなバンドとして検出されることがわかった。p130はv-Crkおよびv-Srcを発現する細胞の双方でチロシン残基でリン酸化され、リン酸化特異的にこれらの蛋白質と結合していることが示された。ペプチダーゼによるマッピングを用いることにより、v-Srcと結合することで知られる130kDの未知の主要基質と、このp130とが同一分子であることが確認された。また正常細胞では脳、精巣に高発現が認められること、リン酸化に伴いp130は細胞質分画から細胞膜分画へ移行することが観察された。SH2保有分子の共通信号制御分子としてp130蛋白質は全く独自の機能を持つと考えられる。本年度にp130の蛋白質精製をJBCに、遺伝子クローニング・免疫化学的解析をEMBO誌にそれぞれ報告した。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] 小川誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)
[Publications] 堺隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)
[Publications] 堺隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)
[Publications] 平野直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)
[Publications] Bruce Mayer: "Evidences that SH2 domains in cis or trans promote precessive phosphorylation of specific substrates by protein-tyrosine kinases." Current Biology. (in press). (1995)
[Publications] 五味玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)
[Publications] 堺隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学第13巻第11号(秀潤社), 976-982 (1994)

1994 Fiscal Year Annual Research Report

Crk結合リン酸化蛋白質p130の機能解析

Principal Investigator

堺 隆一 自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)

Research Products

[Publications] 小川 誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)

[Publications] 堺 隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)

[Publications] 堺 隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)

[Publications] 平野 直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)

[Publications] Bruce Mayer: "Evidences that SH2 domains in cis or trans promote precessive phosphorylation of specific substrates by protein-tyrosine kinases." Current Biology. (in press). (1995)

[Publications] 五味 玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)

[Publications] 堺 隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学 第13巻 第11号(秀潤社), 976-982 (1994)

堺隆一自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)

[Publications] 小川誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)

[Publications] 堺隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)

[Publications] 堺隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)

[Publications] 平野直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)

[Publications] 五味玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)

[Publications] 堺隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学第13巻第11号(秀潤社), 976-982 (1994)