脂質修飾抗体の遺伝子工学的合成および新しいセンシングへの応用

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07044134
• Research Institution: Tokyo Institute of Technology
• Principal Investigator: 相澤 益男 東京工業大学, 生命理工学部, 教授 (00016742)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): KEINANEN Kar フィンランド工学研究センター, 生物工学研究所, 主任研究員 ; 春山 哲也 東京工業大学, 生命理工学部, 助手 (30251656) ; 小畠 英理 東京工業大学, 生命理工学部, 助教授 (00225484)
• Keywords: 脂質修飾抗体 / イムノリポソーム / 免疫センシング / 2-フェニルオキサゾロン / QCM / AFM / 遺伝子工学

Research Abstract

前年度までに作製した、遺伝子工学的に脂質修飾した抗2-フェニルオキサゾロン抗体をフォスファチジルコリンより構成されるリポソームに導入し、イムノリポソーム作製した。そしてこのイムノリポソームを用いて、Quartz Crystal Microbalance(QCM)及びAtomic Foroce Microscopy(AFM)による新しい免疫センシングシステムの構築を行った。
1.QCMによるセンシングシステム
QCM基板上に抗原であるオキサゾロンを吸着し、溶液中の抗原との競合反応によるイムノリポソームの基板への結合を、周波数変化により検出した。その結果、溶液中の抗原量の減少に伴って、より多くのイムノリポソームが基板に結合することによりQCM周波数変化は大きくなり、オキサゾロンを高感度に定量測定することができた。
2.AFMによるセンシングシステム
抗原を吸着したマイカ基板上に、抗原抗体反応により特異的に結合したイムノリポソームをAFMで直接観察することができた。溶液中の抗原量の増加に伴って、イムノリポソームの基板への結合が阻害され、観察されるイムノリポソームの数が減少することが示された。そしてこの時の基板上に結合したイムノリポソームの数をAFMで直接カウンティングすることにより、抗原の定量分析を行えることが示された。
以上の様に、脂質修飾抗体を導入したリポソームを用いて、QCM及びAFMによる新しい免疫センシングシステムを構築することができた。

Research Products

• [Publications] M.AIZAWA et, al.: "A.Fluoro immunoassay Based on Immunoliposomes Containing Genetically Engineered Llpid-Tagged Antibody" Anal.Chem.69. 1295-1298 (1997)
• [Publications] M.AIZAWA et, al.: "Use of a Quartz Crystal Microbalance to Monitor Immunoliposome-Antigen Interaction" Anal.Chem.70. 260-264 (1998)