1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07044234
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
小野 輝夫 新潟大学, 医学部, 教授 (00000927)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
熊谷 英敏 新潟大学, 医学部, 助手 (20281008)
榊原 順 新潟大学, 医学部, 助手 (90242403)
STEIN J.P. ニューヨーク州立大学, 薬理学, 助教授
SCHROEPFER G ライス大学, 化学部, 教授
SHECHTER I. 米国防衛医大, 生化学部, 教授
PRESTWICH G. ニューヨーク州立大学, 化学部, 教授
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| Keywords | エポキシダーゼ(SE) / ベンゾフェノン誘導体 / HMG-CoA還元酵素 / LDL-レセプター / 遺伝子発現 / 染色体8q24.13 / D8S508 / SRE / NF-Y |
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| Research Abstract |
1.SE酵素の構造と機能ドメイン 小野とPrestwichはネズミの△^<99>リコンビナントSEのE.coliでの発現系を確立し、精製SE酵素に対しフォトアフィニティ標識化合物としてベンゾフェノン誘導体を用い、基質、阻害剤、FADアナログの酵素蛋白修飾から結合ドメインの検索を行ない結合領域を推定した。
2.SE酵素の調節 小野と榊原は培養細胞を用いてSE酵素の遺伝子発現調節をHMG-CoA還元酵素、LDL-Rと比較し、LPDS下でのSEmRNAの増加は細胞に25-hydroxycholesterolやコレステロール投与で量依存的に阻止され、Shechterらが解析したスクアレン合成酵素での調節と一致し、内因性に生成されたステロールが転写レベルでSE発現を調節していることが示された。熊谷はHMG-CoA還元酵素の分解過程と比べ、SEのターンオーバーはステロール感受性が低いことを見出した。
3.ヒトSEゲイムDNAの単離と構造決定 榊原はヒトのゲノムライブラリーをスクリーニングし、全長11エクソンを含む17kbのヒトSE遺伝子を単離した。10個のイントロンは87から3.2kbの範囲にあった。
4.ヒトSE遺伝子の染色体局在 榊原はヒトSE遺伝子をクローニングし、これをプローブにマッピングを行なった。SE遺伝子は色体8に存在し、8q24.13に局在することをつきとめ、FISH法でも確認した。この情報を基に遺伝子異常疾患の候補としてLanger-Giedion Syndromeが推定された。
5.SE遺伝子のプロモーター領域の解析 榊原と小野はヒトとネズミのSE遺伝子の5´配列を決定、限られた2つの保存領域がステロールによるSE遺伝子の調節に決定的であることを示した。SS遺伝子でのShechterらによるSRE解析及びTA遺伝子でのSteinらによるレチノイン酸解析との情報交換から、SE遺伝子は主にクラシカルなSRE-like配列及びNF-Y配列がステロール調節の主要なcis-elementになっていると推定された。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Nakamura,Y.: "Transcriptional regulation of squalene epoxidase by sterols and inhibitors in HeLa Cells." J.Biol.Chem.271. 8053-8056 (1996)
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[Publications] McGee,T.P.: "Degradation of HMG-CoA reductase in endoplasmic reticulm membranes is accelerated as a result of incresed susceptibility to proteolysis." J.Biol.Chem.271. 25630-25638 (1996)
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[Publications] Kanda,T.: "Effect of bile on the intestinal bile-acid binding protein (I-BABP) expression.In vivo and in vitro studies." FEBS Lett.384. 131-134 (1996)
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[Publications] Kanda,T.: "Intestinal fatty acid-binding protein is a useful diagnostic marker for mesenteric infarction in humans." Gastroenterology. 110. 339-343 (1996)
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[Publications] 小野輝夫: "Fatty acid synthase complex." 動脈硬化. 23. 403-407 (1996)
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[Publications] Nagai,M.: "Localization of the squalene epoxidase gene to human chromosome 8q24.13." Genomics. (in press). (1997)
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[Publications] 小野輝夫: "生物薬科学実験講座I-3" 広川書店(印刷中), (1997)
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[Publications] 小野輝夫: "メタボリックマップ" 化学同人(印刷中), (1997)
