ステロイド合成P450遺伝子転写調節制御機構

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07044277
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 名和田 新 九州大学, 医学部, 教授 (10038820)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 諸橋 憲一郎 岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所・形質統御実験施設, 教授 (30183114) ; 生山 祥一郎 九州大学, 医学部, 助手 (20184393) ; 柳瀬 敏彦 九州大学, 医学部, 助手 (30239818) ; 高柳 涼一 九州大学, 医学部, 講師 (30154917) ; 香川 憲夫 バンタービルト大学, 医学部, 助教授 ; WATERMAN Mic バンタービルト大学, 医学部, 教授
• Keywords: ステロイド / 転写因子 / 性分化 / P450 / Ad4BP / SF-1 / DAX-1 / 先天性副腎低形成

Research Abstract

1.ヒトAd4BP(SF-1)遺伝子のクローニング、全構造決定と機能解析:
ヒト末梢血リンパ球より作成したゲノムライブラリーよりウシAd4BP cDNAをプローブとしてヒトAd4BP遺伝子をクローニング、全構造を決定した。全長は30kbで7個のエクソンより構成され、461アミノ酸よりなるAd4BPをコードしていた。ラットで明らかになったAd4BP遺伝子発現に重要なE-box配列も保存されていた。ヒト遺伝子構造の解明により、Ad4BP異常症の解析が可能となった。現在Ad4BP異常症候補症例(性分化異常症)について、解析中である。
2.Ad4BPの発現を制御するEbox結合因子のクローニング:
Ebox結合因子の高発現が認められる新生児ラット精巣よりcDNAを調製し、発現ライブラリーを構築した。Ebox結合因子はBasic-Helix-Loop-Helix構造を有する蛋白質ファミリーを形成するが、これらサブファミリーのなかにショウジョウバエの性決定に不可欠であるdaughterless、sisterlessが含まれる。これら2因子はHeterodimerを形成し転写活性化能を示す。そこでこれらサブファミリー内で高度に保存されるBasic-Helix-Loop-Helix領域にDNAプライマーを設定し、新生児ラット精巣cDNAを鋳型としてそれぞれの哺乳類ホモローグをPCR法を用いて単離した。次に、得られたDNAをプローブとして上記のcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、5種類のdaughterlessホモローグを単離し、全ての構造、塩基配列を決定した。このcDNA発現ベクターを用い、Ad4BP遺伝子に対するtransactivation活性を検討したが単独では活性を示さなかった。これはショウジョウバエにおけるdaughterlessの場合と同様であり、現在これらdaughterlessホモローグとHeterodimerを形成する一方のEbox結合因子の単離を行っている。

Research Products

• [Publications] Yanase,T.: "New mutation of DAX-1 genes in two Japanese patients with X-linked adrenal hypoplasia congenita and hypogonedotropic hypogonadism" J.Clin.Endocrinol.Metab.81. 530-535 (1996)
• [Publications] Nomura,M.: "Autoegulatory loop in the regulation of the mammalian ftz-fl gene" J.Biol Chem.271. 8243-8249 (1996)
• [Publications] Imasaki,K.: "Androgen insensitivity syndrome due to new mutation in the DNA-binding domain of the androgen receptor" Mol.Cell.Endocrinol.120. 15-24 (1996)
• [Publications] Imasaki,K.: "Sporadic Reifenstein syndrome due to a De Novo mutation (^<746>Val→Met) of the androgen receptor" Clin.Pediatr.Endocrinol.5. 1-9 (1996)
• [Publications] Nawata,H.: "Abnormalities of sex differentation" Horm.Res.46(Suppl 1). 15-19 (1996)
• [Publications] Nawata,H.: "Androgen insensitivity syndrome" Frontiers in Endocrinology. 17. 107-117 (1996)
• [Publications] Tanaka,S.: "1.25-dihydroxyvitamin D3 enhances the enzymatic activity and expression of the messenger ribonucleic acid for aromatase cytochrome P450 synergistivally with dexamethasone depending on the Vitamin D receptor level in cultured human osteoblasts" Endocrinology. 137. 1860-1869 (1996)
• [Publications] Oba,K.: "Structural characterization of human Ad4bp (SF-1) gene" Biochem.Biophys.Res.Commun.226. 261-267 (1996)
• [Publications] Yanase,T.: "Expression of sterol carrier protein 2(SCP2) in human adrenocortical tissue" Eur.J.Endocrinol.134. 501-507 (1996)
• [Publications] Taniguchi,S.: "Dehydroepiandrosterone markedly inhibits the accumulation of cholesteryl ester in mouse macrophage J774-1 cells" Atherosclerosis. 126. 143-154 (1996)
• [Publications] Ikuyama,S.: "Follicle stimulating hormone-β subunit gene is expressed in parallel with a transcription factor Ad4BP / SF-1 in human pituitary adenomas" Clin.Endocrinol.45. 187-193 (1996)
• [Publications] Ohe,K.: "Identical origin of adrenal cortex and gonad revealed by expression profiles of Ad4BP/SF-1" Mol.Endocrinol.10. 826-836 (1996)
• [Publications] Hatano,O.: "Identical origin of adrenal cortex and gonad revealed by expression profiles of Ad4BP/SF-1" Genes to Cells. 1. 663-671 (1996)
• [Publications] Kagawa,N.: "AcAMP-regulatory sequehce (CRS1) of CYP17 is a cellular target for the homeodomain protein Pbxl" J.Biol.Chem.269. 18716-18719 (1996)
• [Publications] 諸橋憲一郎: "生殖腺の性分化とAd4BP/SF-1" 蛋白質 核酸 酵素. 41(8). 1033-1041 (1996)