1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07044282
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| Research Institution | KUMAMOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
山村 研一 熊本大学, 医学部, 教授 (90115197)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
BALLING Rudo ドイツ哺乳類遺伝学研究所, 所長
今井 賢治 ドイツ哺乳類遺伝学研究所, 研究員
ARTZT Karen テキサス大学, 動物学, 教授
要 匡 熊本大学, 医学部, 助手 (40264288)
阿部 訓也 熊本大学, 医学部, 助教授 (40240915)
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| Keywords | トランスジェニックマウス / YAC / BAC / 発生 / ポジショナルクローニング / 突然変異体 |
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| Research Abstract |
本研究ではポジショナルクローニング法とトランスジェニックマウス技術を結びつけ、巨大ゲノムDNA導入による突然変異の機能的レスキューを指標とし、突然変異責任遺伝子を同定、単離する手法を確立することを目的とする。前年度はYAC(酵母人工染色体)導入マウス作製の基本技術の確立を行ない、3系統のトランスジェニックマウスの樹立に成功した.YACクローンはインサートサイズが他のクローニングシステムと比較して大きいという利点を持つが、酵母内での相同組換えによりキメラ形成や欠失などDNAの再構成がかなりの頻度で起こることが知られている.実際、我々の用いたYAC650kbの内左右両端、計350kb程度はキメラ部分であった.このようなYACの性質から、正確なゲノムの物理地図を作るのは困難な場合があり、さらにYACレスキューを指標として原因遺伝子を同定しようとする場合、ポジティブな結果が得られればよいが、ネガティブな場合は結論がでないことになる.BAC(細菌人工染色体)は大腸菌内で複製し、150-300kb程度のインサートを持つ.したがってインサートサイズはYACより小さいがより安定に存在し、DNA再構成は殆どないことが知られている.我々はtw5、tkの領域においてこれまでYACによってカバーしていた部分をBACで取り直しコンティグを作製した.その結果、tk遺伝子座ではD9Mit9を中心とした約500kb、4種類のBACクローンでカバーされる領域に原因遺伝子が存在することを見出し、t^<w5>ではH-2KからD17Mit148までの約1000kbのゲノム領域に原因遺伝子があり、その大半の部分をBACによってクローニングした.さらに、tk領域のBACクローンを導入したトランスジェニックマウス作製を始めている.BACインサートの調製はYACDNA調製に用いた方法を応用し、ラムダファージのタ-ミネース酵素で線状化し、マイクロインジェクション法にてマウス受精卵に導入した.その結果、これまで24匹のマウスが得られ、4匹にトランスジーンの組込みが認められた(うち2匹は出生時に死亡).現在これから系統の樹立を行っており、また他のクローンに関してもDNA調製、トランスジェニックマウス作製を進めている.
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[Publications] Kimura, S. et al.: "A 900 bp genomic region from the mouse dystrophin promoter directs lacZ reporter expression only to the right heart of transgenic mice." Dev. Growth Diff.(in press). (1997)
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[Publications] Abe, K. et al.: "Purification of primordial germ cells from TNAP^<β-geo> mouse embryos using FACS-gal." Develop. Biol.180. 468-472 (1996)
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[Publications] Abe, K. et al.: "Endoderm-specific gene expression in embryonic stem cells differentiated to embryoid bodies." Exptl. Cell Res.229. 27-34 (1996)
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[Publications] Ando, A. et al. et al.: "cDNA cloning of the human homologues of the mouse Ke4 and Ke6 genes at the centromeric end of the human MHC region." Genomics. 35. 600-602 (1996)
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[Publications] Niwa, H. et al.: "Cell-cycle-dependent expression of the STK-1 gene encoding a novel murine putative protein kinase." Gene. 169. 197-201 (1996)
