CD45のB細胞分化段階特異的作用機序の分子基盤

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07044301
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
• Principal Investigator: 矢倉 英隆 東京都神経科学総合研究所, 微生物・免疫学, 参事 (60166486)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 水野 一也 東京都神経研, 微生物・免疫, 副参事 (00219643) ; 片桐 達雄 東京都神経研, 微生物・免疫, 主事 (00233742) ; 荻本 真美 東京都神経研, 微生物・免疫, 主事 (80158609) ; GARY Koretzk アイオワ大学医学部, 内科学, 準教授
• Keywords: CD45 / アポトーシス / SHP-1 / SLP-76

Research Abstract

【研究目的】本研究では、CD45の分化段階特異的な作用機序の分子基盤について、CD45の基質、その制御機構、下流のシグナル伝達経路を解析することにより、明らかにしようとしている。
【研究成果】
(1)CD45によるLynキナーゼの制御機構:未熟B細胞株WEHI-231において、LynがCD45の選択的な基質になっていること、しかもLynのチロシンリン酸化とキナーゼ活性をネガティブに制御していることを明らかにした。その機構を解明するために、WEHI-231細胞とCD45陰性クローン^<32>Pで標識した後、Lynをcyanogenbromideで切断し、SDS-PAGEで展開して自己リン酸化部位とネガティブ制御部位のリン酸化の程度を比較した。その結果、CD45陰性クローンでは両部位のチロシンリン酸化が抗原レセプター刺激以前に亢進していることが明らかになり、Lynの酵素活性は両部位のリン酸化のバランスにより制御されている可能性が示唆された。
(2)CD45により制御されるシグナル伝達経路:成熟B細胞株BAL-17とそのCD45陰性クローンを用いて、MAPキナーゼファミリーの活性化を比較検討した。その結果、CD45矢先によりERKの活性化が増強すると、JNKの活性化には著しい相違は見られないことが明らかになった。現在、p38の活性を検討すると同時に、WEHI-231での制御についても検討している。
(3)SHP-1結合蛋白の同定:WEHI-231、BAL-17において、抗原レセプター刺激後にチロシンリン酸化される少なくとも3種類(150kD、110kD、75kD)の蛋白がSHP-1-GSTと結合すること、この結合は細胞内でも同様に認められること、結合分子中の75kDの分子がSH2領域を含む造血系の分子SLP-76であり、その結合は抗原レセプター刺激以前から認められることなどを明らかにした。

Research Products

• [Publications] Nomura,T.: "Antigen receptor-mediated B cell death is blocked by signaling via CD72 or treatment with dextran sulfate and is defective in autoimmunity-prone mice." International Immunology. 8・6. 867-875 (1996)
• [Publications] Mizuno,K.: "Hematopoietic cell phosphatase,SHP-1,is constitutively associated with the SH2 domain-containing leukocyte protein,SLP-76,in B cells." J.Experimental Medicine. 184・2. 457-463 (1996)