1995 Fiscal Year Annual Research Report
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07250201
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
中村 幸治 筑波大学, 生物科学系, 講師 (40212097)
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| Keywords | SRP RNA / 蛋白質伸長因子EF-G / 枯草菌 / 大腸菌 / 4.5S RNA / 低分子RNA / scRNA / リボ蛋白質複合体 |
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| Research Abstract |
SRP RNAは、正真細菌からヒトにいたるまで広く生物界に保存されているRNAである。真核生物のSRP RNAは、シグナル認識粒子(SRP)の構成成分であり、大きさは、約300残基で、Alu反復配列に相同な部分とSは100残基である。枯草菌のscRNAでは、ドメインI,II,IVに相当する約271残基からなる。真正細菌のSRP RNAの構造・機能相関に関するこれまでの実験から以下の知見が得られた。
(1)大腸菌4.5S RNA結合蛋白質の検索と構造解析
4.5S RNA結合蛋白質をゲルシフト法を用いて検索したところ、2種類の大きさの異なるバンドが得られた(complex1,2)。Ffh蛋白質が4.5S RNA結合能を持つことが明らかとなっているが、精製したFth蛋白質を用いてゲルシフト実験を行ったところ、complex2と同じ移動度を示した。DEAE-SephadexA-50,Sephadex G-100により、complex1形成に関わる蛋白質を精製したところ、78kDaの蛋白質(P78)が検出された。N末端のアミノ酸配列を解析し、ホモロジーサーチを行ったところ、P78は蛋白質合成伸長因子EF-Gであった。さらに、EF-Gの4.5S RNA結合活性はGDPの添加により約3倍増加した。以上の結果から、EF-Gが新規の4.5S RNA結合蛋白質として同定された。
(2)枯草菌scRNAの生体内での局在とscRNPの精製.
枯草菌のscRNAはFfh蛋白質(50kDa)とscRNPを形成している。ショ糖密度勾配遠心法によりscRNPは8.2Sの沈降係数を示した。scRNAとFfh蛋白質をマーカーにして、ω-アミノペンチル、DEAE-セファロースCL-6B,Ffh抗体カラムを用いてscRNPを精製したところ、scRNPには、Ffh蛋白質に加えて、24kDaの蛋白質が含まれていた。一方、精製Ffhを用いて、EDACによる化学架橋実験を行ったところ、Ffhは分泌蛋白質のシグナル配列と特異的に結合した。以上のことから、枯草菌のscRNPは真核生物のSRP様粒子の働きを持つことが示唆された
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Nakane,A.et al.: "Acquisition of azide-resistance by elevated ATPase activity of SecA confers azide-resistance upon cell growth and protein translocation in Bacillus subtilis." Microbiology. 141. 113-121 (1995)
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[Publications] Ogawa,K.et al.: "Determination of a 21548 bp uncleotide sequence around the 24° region of the Bacillus subtilis chromosome." Microbiology. 141. 269-275 (1995)
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[Publications] Shibata, T. et al.: "Depletion of small cytoplasmic RNA (scRNA)confers fusidic-acid resistance on Bacillus subtilis." Biochem. Biophys. Res. Commun.210. 317-323 (1995)
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[Publications] Oguro, A. et al.: "srb : a Bacillus subtilis gene encoding a homologue of the α-subunit of the mammalian signal recognition particle receptor." DNA Res.2. 95-100 (1995)
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[Publications] Nakamura, K. et al.: "Small cytoplasmic RNA (scRNA) gene from Clostridium perfringens can replace the gene for the Bacillus subtilis scRNA in both growth and sporulation." Microbiology. 141. 2965-2975 (1995)
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[Publications] Oguro, A. et al.: "The effect of Srb, a homologue of mammalian SRP receptor α-subunit, on Bacillus subtilis growth and protein translocation." Gene. (発表予定). (1996)
