1995 Fiscal Year Annual Research Report

RhoのターゲットとしてのCD44ERM-アクチンシステム

Research Project

Project/Area Number	07256208
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	月田早智子京都大学, 医療技術短期大学部, 教授 (00188517)
Keywords	rho / 細胞接着 / アクチン / CD44 / ERM / rhoGDI / GTP-γS / ラディキシン
Research Abstract	低分子量GTP結合蛋白質のうち、rhoは、細胞接着やストレスファイバー/分裂溝の形成に関わっていることから、アクチンフィラメントと細胞膜の結合部位がそのターゲットではないかと推測されている。しかし、アクチンフィラメントと細胞膜の結合部位の基本的な分子構築に関する我々の理解が浅かったために、rhoのアクチン系への作用メカニズムに関しては解析がなかなか進まなかった。我々は、アクチンフィラメントと細胞膜の結合のための基本ユニットとして、上述のCD44-ERM-アクチンシステムを同定し、そこにrhoGDIが存在する事を見いだした。したがって、このシステムがrhoの直接のターゲットとなっている可能性が高い。本研究は、CD44とERMの結合およびERMとアクチンの結合にrhoがどのような影響を及ぼすかについてin vivoとin vitroの両面からアプローチした。作業仮説としては、CD44とERMの結合、または、ERMとアクチンフィラメントの結合が、rhoによって制御されていると考えた。このことを証明するためには、まず、in vitroでこれらの結合を測定できるシステムを構築する事が必要である。そのために: (1)エズリン、ラディキシン、モエシンをそれぞれバキュロウイルスの系を用いて、大量発現させ、精製した。 (2)CD44の細胞質領域とGSTの融合蛋白質を大腸菌で作らせた。 (3)グルタチオンカラムを用いて、GST-CD44とリコンビナントERMとの結合を測定する系を構築した。 (4)アクチンフィラメントとリコンビナントERMとの結合を、やはり、in vitroで検出する系を確立した。このようにして確立したCD44とERM、およびERMとアクチンフィラメントの結合のアッセイ系を用いて、これらの結合に対するrhoの影響を調べた。 (1)rhoとしては、大阪大学高井義美教授から頂いたリコンビナントを用いた。 (2)rhoをGTP-γS、およびGDP存在下で、上記のアッセイ系に加え、GTPの状態によってrhoの影響に変化があるかを調べた。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Sagara, J. et al.: "Cellular actin-binding ezrin-radixin-moesin (ERM) family proteins are incorporated into the rabies virion and closely associated with viral envelope proteins in the cell" Virology. 206. 485-494 (1995)
[Publications] Takahashi, K. et. al.: "Translocation of activated Rho from the cytoplasm to membrane rufflong area, cell-cell adhesion sites, and cleavage furrows" Oncogene. 11. 39-48 (1995)
[Publications] Takeda, H. et. al.: "V-src kinase shifts the cadherin-based cell adhesion from the strong to the weak state and beta-catenin is not required for the shift." Journal of Cell Biology. 131. 1839-1847 (1995)
[Publications] Hirao, M. et. al.: "Phosphoinositide-dependent association of ERM proteins with the cytoplasmic domain of CD44 in vitro" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)
[Publications] Tsukita, Sa et. al.: "The small GDP-binding protein rho regulates the formation of the CD44-ERM complex associated with rho-GDI" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

RhoのターゲットとしてのCD44ERM-アクチンシステム

Principal Investigator

月田 早智子 京都大学, 医療技術短期大学部, 教授 (00188517)

Research Products

[Publications] Sagara, J. et al.: "Cellular actin-binding ezrin-radixin-moesin (ERM) family proteins are incorporated into the rabies virion and closely associated with viral envelope proteins in the cell" Virology. 206. 485-494 (1995)

[Publications] Takahashi, K. et. al.: "Translocation of activated Rho from the cytoplasm to membrane rufflong area, cell-cell adhesion sites, and cleavage furrows" Oncogene. 11. 39-48 (1995)

[Publications] Takeda, H. et. al.: "V-src kinase shifts the cadherin-based cell adhesion from the strong to the weak state and beta-catenin is not required for the shift." Journal of Cell Biology. 131. 1839-1847 (1995)

[Publications] Hirao, M. et. al.: "Phosphoinositide-dependent association of ERM proteins with the cytoplasmic domain of CD44 in vitro" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)

[Publications] Tsukita, Sa et. al.: "The small GDP-binding protein rho regulates the formation of the CD44-ERM complex associated with rho-GDI" Journal of Cell Biology. (in press). (1996)

月田早智子京都大学, 医療技術短期大学部, 教授 (00188517)