1995 Fiscal Year Annual Research Report
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07262213
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
安部 眞一 熊本大学, 理学部, 教授 (90109637)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 卓 熊本大学, 理学部, 助手 (90244102)
高宗 和史 熊本大学, 理学部, 講師 (20206882)
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| Keywords | 精子分化 / 減数分裂開始 / 精原細胞 / 第一精母細胞 / セルトリ細胞 / FSH / cDNA / activin A |
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| Research Abstract |
(1)イモリactivin/inhibin βA subunit mRNAの精巣における発現:脊椎動物に共通なactivin/inhibin β subunitのoligo DNAプローブを作成し、reversetranscriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)によりβA subunitとβB subunit cDNAを単離した。これをプローブとして、精原細胞ステージ、精母細胞ステージ、丸い精細胞ステージから抽出したRNAを用いてノザンブロッティングを行ったところ、βB subunitはいずれのステージにおいても検出されず、βA subunit精原細胞ステージのみ約6KBのmRNAが検出された。次に、βA subunit mRNAを発現する細胞を同定するために、精巣を解離し精原細胞とセルトリ細胞を分離し、それぞれの細胞からRNAを抽出しRT-PCRを行ったところ、セルトリ細胞のみでβA subunit mRNAが検出された。イモリactivin/inhibin βA subunitのcoding regionを含むcDNAを単離した。
(2)FSH処理によるactivin/inhibin βA subunit mRNAの発現:精原細胞ステージの精巣断片を基本培養液で1週間器官培養し、精原細胞の増殖活性を低下させた後FSHを加えて経時的にRNAを抽出し、βA subunit cDNAをプローブとしてノザンブロットを行ったところ、FSHを加えて3日目にβA subunit mRNAの発現量が増加し、7日目までその発現が維持されることが明らかになった。
(3)ヒトactivin Aによるイモリ精原細胞の増殖活性の促進:精原細胞ステージの精巣断片を基本培養液で1週間器官培養した後、ヒトactivin A(味の素株式会社研究所の江藤譲先生より供与)を100ng/ml加えてさらに1週間培養すると、対照では精原細胞の増殖活性はほとんど無いのに対し、著しく増殖活性を促進した。これらの結果は、イモリ精巣においてFSHがセルトリ細胞に働いてactivin A遺伝子の発現を促進し、タンパク質が分泌されて精原細胞に働き、その増殖活性を促進するものと思われる。
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[Publications] K.Maekawa,Z.-S.Ji and S.-I.Abe: "Proliferation of newt spermatogonia by mammalian FSH via Sertoli cells in vitro." J.Exp.Zool.272. 363-373 (1995)
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[Publications] Z.-S.Ji,K.Kubokawa and S.-I.Abe: "Promotion of differentiation of newt primary spermatocytes into spermatids by mammalian FSH via Sertoli cells." J.Exp.Zool.272. 374-383 (1995)
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[Publications] K.Takamune,K.Teshima,M.Maeda and S.-I.Abe: "Characteristic features of preleptotene spermatocytes in Xenopus laevis : Increase in the nuclear volume and first appearance of flattened vesicles in these cells." J.Exp.Zool.273. 264-270 (1995)
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[Publications] T.Yamamoto,T.Hikino and S.-I.Abe: "Differential expression of annexin V during spermatogenesis in Cynops pyrrhogaster." Roux Arch.Dev.Biol.(in press). (1996)
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[Publications] 安部眞一: "生殖細胞" 共立出版(印刷中), (1996)
