大腸菌RuvCエンドヌクレアーゼの構造と機能

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07268211
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 岩崎 博史 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60232659)
• Keywords: ホリデ-構造 / RuvCエンドヌクアーゼ / X線結晶構造解析 / 相同組換え / 蛋白質立体構造 / DNA認識 / 大腸菌

Research Abstract

大腸菌RuvCタンパク質は相同組換え反応の中間体であるホリデ-構造を特異的に認識し切断するエンドヌクレアーゼである。ホリデ-構造は,相同な2分子の2重鎖DNAが相互に単鎖DNAを交換しリンクしたユニークな高次構造である。それをRuvCがどのように認識して切断するかという点に注目して,タンパク質の構造と機能との相関関係を明らかにすることが,本研究の目的である。我々は,前年度までに,X線結晶構造解析によりRuvCの立体構造を明らかにしており,また,構造との相関を図るために,多数のミュータントを単離していた。本年度においては,今までの解析や準備をもとに,RuvCミュータントタンパク質をそれぞれ精製し,各々の生化学的な解析を行い,in vivoのキャラクラリゼーションと併せて,RuvC蛋白質の機能(活性中心,DNA結合,2量体形成など)に関与するアミノ酸残基をほとんどすべて同定することができた。

Research Products

• [Publications] A.Saito, et al.: "ldentification of four acidic amino acids that constitute the catalytic center of the RuvC Holliday junction resolvase" Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92. 7470-7474 (1995)
• [Publications] H.Shinagawa, et al.: "Molecular mechanisms of Holliday junction processing in Eschevichia coli" Adv. Biophys.31. 49-65 (1995)