無細胞DNA除去修復系を用いた色素性乾皮症蛋白質の解析

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07272244
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 益谷 央豪 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
• Keywords: ヌクレオチド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPC / HHR23B / XPF / XPG

Research Abstract

高発がん性のヒト遺伝病である色素性乾皮症(XP)は、DNA除去修復に欠損をもつAからGの7つの相補性群及びヴァリアントに分類されている。本申請者らは、クロマチン構造をとったDNAを用いた高精度の無細胞ヌクレオチド除去修復系を構築し、既に、XPC及びHHR23Bという新しい修復因子の複合体を固定しており、本年度は、その組み換え蛋白質を作成して解析を行った。また、既に、他のXP細胞抽出液についても、その相補活性を検出しており、それらについても解析を進めた。
1色素性乾皮症(XP)C群蛋白質の解析
バキュロウイルス系を用いて作成した。XPC蛋白質は、強くDNAに結合するというXPC-HHR23B複合体のもつ性質を単独で示した。また、無細胞ヌクレオチド除去修復系において、XP-C群細胞抽出液の修復欠損を相補した。しかし、XP-C群細胞抽出液中に存在する過剰のHHR23Bを除去した修復系においては、XPC蛋白質単独では、弱い相補活性しか見られず、組み換えHHR23Bの添加により修復活性は、著しく促進されたことから、両者が共存することが除去修復に重要であると考えられる。
2新たな修復因子の同定
無細胞修復系を用い、XP-F群及びXP-G群細胞抽出液の修復欠損を相補する蛋白質の精製を進めた。その結果、XPF相補活性は、ERCC1及びERCC11細胞抽出液を相補する活性と挙動を共にした。この画分は、構造特異的なエンドヌクレアーゼ活性を持ち、除去修復反応において、DNA損傷の5'側を切断すると考えられる活性を検出した。XPGは、ほぼ単一にまで精製し、これも構造特異的なエンドヌクレアーゼ活性を持つことを明かにした。このヌクレアーゼは、損傷の3'側の切断を行うことができると考えられるものであった。現在、さらに除去修復因子の同定を進めており、無細胞系の再構成を進めている。

Research Products

• [Publications] Matsumoto,K. et al.: "Stimulation of DNA synthesis by mouse DNA nelicase B in a DNA replication system containing eukaryotic replication origin." Biochemistry. 34. 7913-7922 (1995)
• [Publications] Matsuda,T. et al.: "DNA repair proeion XPA binds taplication protein A(RPA)." Jounal of Biological Chemistry. 270. 4152-4157 (1995)
• [Publications] Kamiya,H. et al.: "8-nydrcxyadenine(7,8-dihydro-8-oxcadenine)induces misincorporation in in intro DNA synthesis and mutations in NIH 3T3 alls." Nucleic Acids Research. 23. 2893-2899 (1995)
• [Publications] Kamiya,H. et al.: "Comparison of incorporation and extension of nuclcotides in vitro opposite 8-hydroxyguamine(7,8-dihydro-8-oxoguanine)in hot spots of the c-Ha-rasgene." Japanese Jaurnal of Cancer Research. 86. 270-276 (1995)