1995 Fiscal Year Annual Research Report

HLA-A26拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子の同定

Research Project

Project/Area Number	07274269
Research Institution	Kurume University
Principal Investigator	伊藤恭悟久留米大学, 医学部, 教授 (50125499)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	今井康久久留米大学, 医学部, 助手 (90268847) 中尾真修久留米大学, 医学部, 助手 (40258447)
Keywords	癌退縮抗原 / 遺伝子クローニング / 扁平上皮癌 / HLA-A2601拘束性 / キラーT細胞 / 抗原ペプチド
Research Abstract	HLA-A2601拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子と考えられるcDNA (6A1と仮称)を以下の方法を用いてクローニングした。 1)一次スクリーニング: HLA-A2601 gene及びcDNAライブラリーのVA13 cellsへのdouble transfection及びCTLとIFNγELISAによるスクリーニング。リポフェクチン法にてHLA-A2601 geneとKE4癌細胞株cDNAライブラリーをVA13 cellにdouble transfectした。HLA-A2601拘束性CTL (10000 cells/well/200μl)を加えてさらに18時間培養し、上清中のIFNγ値をELISAにて測定した。 2)二次スクリーニング:一次スクリーニングにて陽性であった4 wellsからのcDNAライブラリーをさらに二次スクリーニングに提供し、合計800個(4×200)のコロニーよりプラスミドDNAを作成しHLA-A2601とともにVA13 cellsにdouble transfectionし1)同様の操作にて約20個の陽性クローンを得た。 3)三次スクリーニング:二次スクリーニングにて陽性であった20個のクローンを再度検定し2個のクローン(6A1と14G1)をえた。これらの遺伝子をSP6及びT7プライマーを用いて搬入遺伝子の塩基配列を自動塩基配列解析装置(pharmacia社)を用いて決定した。 4) 6A1は1.2kb, 14G1は3.2kbのこれまでに報告されてない塩基配列であった。両クローンを再度検定し、活性のより明確な6A1を先発して研究を推進させつつある。即ちdeletion mutantを作成しHLA-A2601結合性癌抗原ペプチド及びNortherh Blot法にて組織分布を実施中である。以上要約すると6A1遺伝子は約1.2kbより成り膜貫通部分と思われる構造を有し、Gene Bankでの検索では新規のものと考えられる。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Shichijo, S.: "Detection of MAGE-4 protein on lung cancers." Int. J. Cancer. 64. 158-165 (1995)
[Publications] Shichijo, S.: "Establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring cellular MAGE-4 protein on human cancers" J. Immunol. Meth.186. 137-149 (1995)
[Publications] Yamada, A.: "Expression of MAGE genes in ovarian tumors." Int. J. Cancer. 64. 388-393 (1995)
[Publications] Takahashi, K.: "Identification of MAGE-1 and-4 proteins in spermatogonia and primary spermatocytes of testis." Cancer Res.55. 3478-3482 (1995)
[Publications] Nakao, M.: "HLA A2601-restricted cytotoxic T lymphocytes recognizing a peptide antigen expressed on squamous cell carcinoma." Cancer Res.55. 4248-4252 (1995)
[Publications] Sugita, S.: "Melanocyte Lysis by CTL Recognizing the MART-1 Melanoma Antigen in HLA-A2 Patients with Vogt-Koyanagi-Harada (VKH) Disease." Int. Immunol.8(in press). (1996)
[Publications] Itoh, K.: "Biology of Renal Cell Carcinoma" Ronald M. Bukowski, James H. Finke, Eric A. Klein, Springer-Verlag, 1995
[Publications] Itoh, K.: "International Reviews of Immunology." (eds) Kumagai, K., Kasakura, S., Springer-Verlag (in press), (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

HLA-A26拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子の同定

Principal Investigator

伊藤 恭悟 久留米大学, 医学部, 教授 (50125499)

Research Products

[Publications] Shichijo, S.: "Detection of MAGE-4 protein on lung cancers." Int. J. Cancer. 64. 158-165 (1995)

[Publications] Shichijo, S.: "Establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring cellular MAGE-4 protein on human cancers" J. Immunol. Meth.186. 137-149 (1995)

[Publications] Yamada, A.: "Expression of MAGE genes in ovarian tumors." Int. J. Cancer. 64. 388-393 (1995)

[Publications] Takahashi, K.: "Identification of MAGE-1 and-4 proteins in spermatogonia and primary spermatocytes of testis." Cancer Res.55. 3478-3482 (1995)

[Publications] Nakao, M.: "HLA A2601-restricted cytotoxic T lymphocytes recognizing a peptide antigen expressed on squamous cell carcinoma." Cancer Res.55. 4248-4252 (1995)

[Publications] Sugita, S.: "Melanocyte Lysis by CTL Recognizing the MART-1 Melanoma Antigen in HLA-A2 Patients with Vogt-Koyanagi-Harada (VKH) Disease." Int. Immunol.8(in press). (1996)

[Publications] Itoh, K.: "Biology of Renal Cell Carcinoma" Ronald M. Bukowski, James H. Finke, Eric A. Klein, Springer-Verlag, 1995

[Publications] Itoh, K.: "International Reviews of Immunology." (eds) Kumagai, K., Kasakura, S., Springer-Verlag (in press), (1996)

伊藤恭悟久留米大学, 医学部, 教授 (50125499)