1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07455331
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
石川 治男 大阪府立大学, 工学部, 教授 (00081349)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荻野 博康 大阪府立大学, 工学部, 助手 (80233443)
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| Keywords | 有機溶媒耐性酵素 / 有機溶媒耐性微生物 / リパーゼ / Pseudomonas aeruginosa |
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| Research Abstract |
リパーゼは油脂の加水分解、エステル加水分解反応およびエステル合成反応を触媒する酵素であるため、油脂の分解やエステル交換による油脂の改質、さらには化学合成法では容易に行うことのできないエステルの不斉合成など、多くの有用物質生産に用いられている。
これらの基質や生成物は水に不溶である場合が多く、有機溶媒存在下で反応を行うことができれば有利なことが多い。しかしながら、一般に酵素は有機溶媒存在下では容易に変性、失活する。そこで本研究では、自然界から得た有機溶媒に安定なリパーゼの安定性の原因を解明し、工業的に極めて有用である有機溶媒耐性リパーゼを創製することを目的とする。本年度は、有機溶媒耐性微生物Pseudomonas aeruginosa LST-03株が産生するリパーゼの精製を行い、種々の性質を調べた。また、本酵素の遺伝子のクローニングをショットガン法で試みた。成果の概要は以下の通りである。(1)LST-03株の培養上清を透析することにより脱塩した後、DEAE-Sepharose FFを用いた陰イオン交換クロマトグラフィー、およびPhenyl-Toyopearl 650Mを用いたTriton X-305存在下での疎水クロマトグラフィーを行い、さらにSuyperdex 200pgを用いたゲルクロマトグラフィーを行うことにより、培養上清に含まれるリパーゼを精製した。
(2)リパーゼの精製標品を用いて種々の性質を調べたところ、分子量約30,000、至適温度45℃、至適pH9.5であり、pH4〜11および70℃以下で安定であることがわかった。(3)LST-03株の染色体DNAより、ショットガンクローニング法でリパーゼ遺伝子のクローニングを試みたところ、リパーゼ遺伝子を含む8種類のDNA断片が得られた。
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