Phytoplasmaの起源は植物か昆虫か-その分子進化学的新展開

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07456026
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 難波 成任 東京大学, 農学部, 教授 (50189221)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 石川 幸男 東京大学, 農学部, 助教授 (60125987)
• Keywords: ファイトプラズマ / 16SrRNA遺伝子 / Macrosteles striifrons / Scleroracus flavopictus

Research Abstract

各種ファイトプラズマ分離株を集め、そのゲノムを精製し、PCRにより16SrRNA遺伝子を増幅した。次いで、増幅した16S遺伝子試料を精製し、ダイレクトシークエンスにより全塩基配列を決定した。また、大型コンピュータのデータベースをもとに、海外のファイトプラズマを含む他の微生物の16SrRNA遺伝子の最新の配列データを検索した。大型コンピュータ解析ブログラム「ODEN」により分子系統樹を構築し、「Bootstrap」を行い信頼性を解析した。得られた解析データをもとに、ファイトプラズマの分類体系を確立し、分子系統学的な変異が媒介昆虫適応による分化と植物種適応による分化のどちらと有意な相関関係があるかを解析し、その起源を推定した。以上の解析データと分類体系をもとに、ファイトプラズマに「種」の分類を適用し、その判別に最適な「種」特異的プライマーをデザイン・合成した。合成したプライマーを用いて各々の「種」特異的PCRにより、アジア各地の未知のファイトプラズマ分離株の分類を試み、プライマー・PCRステップの改良を図り、分子疾学的診断システムを確立した。I群ファイトプラズマの媒介虫であるMacrosteles striifronsおよびIII群ファイトプラズマの媒介虫であるScleroracus flavopictusを野外から採集し、継代飼育した。ついで殺虫剤撒布による耐性系統の選抜を行った。そしてライフサイクルを同調させ、それぞれの飼育系を確立した。

Research Products

• [Publications] Namba, S.: "Family description : Capillovirus. In Classification and Nomenclature of Viruses,VIth ICTV Report." Archives of Virology. Supplementum. 465-467 (1995)
• [Publications] Candresse,T.,Namba,S.and Martelli,G.P.: "Family description:Trichovirus. In Classification and Nomenclature of viruses,VIth ICTV Report." Archives of Virology.Supplementum. 468-470 (1995)
• [Publications] Ohira,K.,Namba,S.,Rozanov,M.,Kusumi,T.and Tsuchizaki,T.: "Complete sequence of an infectious full-length cDNA clone of citrus tatter leaf capillovirus : comparative sequence analysis of capillovirus genomes." J. General Virol.76. 2305-2309 (1995)
• [Publications] 難波成任: "ファイトプラズマ研究の新展開" 植物防疫. 49. 11-14 (1995)
• [Publications] 難波成任: "植物病理学事典" 養賢堂(岸 國平他編), 15 (1995)
• [Publications] 難波成任: "ウィルス学" 朝倉書店(畑中正一編), 11 (1995)