ペスティウイルス及びC型肝炎ウイルスの成熟複製機構に関する研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07456137
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• Research Institution: 国立予防衛生研究所
• Principal Investigator: 松浦 善治 国立予防衛生研究所, ウイルス第二部, 室長 (50157252)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 真鍋 昇 京都大学, 農学部, 助教授 (80243070) ; 宮村 達男 国立予防衛生研究所, ウイルス第二部, 部長 (90100099)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / ペスティウイルス / ウイルスの成熟機構

Research Abstract

1)全遺伝子領域をカバーするcDNAクローンの作製および全塩基配列の決定
全遺伝子領域をカバーするcDNAクローンの作製に関しては、BVDVではほぼ完全長のcDNAを作製し、現在全配列を決定しつつある。HCVでは全長をクローニングし全塩基配列を決定した。
2)ウイルス蛋白の発現
最近、バキュロウイルスが適当なプロモーターを選べば、哺乳動物細胞でも遺伝子を発現できることが明らかとなった。そこでクローン化された遺伝子を哺乳動物細胞内で効率に働くCAGプロモーターに組み込んだ組換えバキュロウイルスを作製し各種動物細胞での発現を試みている。
3)ウイルス粒子形成の条件の検討
上記の組換えバキュロウイルスを用いて予め細胞質内にHCVのコア蛋白を発現させておき、そこにディゴキシゲニンでラベルしたHCVの各種領域をカバーするウイルスセンスあるいはそれと相補的なRNAをトランスへフェクトして、コア蛋白と結合するRNA領域を解析した。その結果コア蛋白はウイルスセンス(プラス鎖)RNAのコア蛋白をコードする領域と特異的に結合することが明らかとなった。この成績はウイルスの成熟過程、特にエンキャプシデーションを解析する上で極めて意義深いと思われる。
4)特異抗体の作製
発現された蛋白を精製し、これをウサギ及びマウスに免疫し、モノスペシィフィック及びモノクローナル抗体を作製している。

Research Products

• [Publications] Shoji, I.: "Proteolytic activity of NS3 serine proteinase of hepatitis C virus efficiently expressed in Escherichia coli." Hepatology. 22. 1648-1655 (1995)
• [Publications] Suzuki, T.: "In vitro and in vivo trans-cleavage activity of hepatitis C virus serine protease expressed by recombinant baculoviruses." J. Gen. Virol.76. 3021-3029 (1995)
• [Publications] Makimura, M.: "Induction of antibodies against HCV structural proteins in mice using recombinant adenovirus." Vaccine. (in press).
• [Publications] Koike, K.: "Expression of hepatitis C virus envelope proteins in transgenic mice." J. Gen. Virol.76. 3031-3038 (1995)
• [Publications] Harada, T.: "Characterization of an established human hepatoma cell line constitutively expressing nonstructural proteins of hepatitis C virus by transfection of viral cDNA." J. Gen. Virol.76. 1215-1221 (1995)
• [Publications] Suzuki, R.: "Nuclear localization of the truncated hepatitis C virus core protein deleted in its hydrophobic C-terminus." J. Gen. Virol.76. 53-61 (1995)