光合成単細胞真核生物(ユ-グレナ)プロテインキナーゼCの機能解析と分子進化

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07456149
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 南森 隆司 神戸大学, 農学部, 助教授 (00180555)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 王子 善清 神戸大学, 農学部, 教授 (90031195) ; 深見 泰夫 神戸大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (00156746)
• Keywords: PROTEIN KINASE C / SIGNAL TRANSDLICTION / EUGLENA / PROTEIN KINASE

Research Abstract

本年度の本研究では、ミドリムシ(Euglena gracilis Z)からPKCの分離、精製を試み、硫安沈殿及び二段階のカラムクロマトグラフィー(陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性カラムクロマトグラフィー)により、リン脂質依存性/カルシウム依存性PK活性画分を得、これについて免疫化学的解析及び自己リン酸化能を行った。その結果、ミドリムシにはPKC活性が発現されていることが判明した。次に、既知のPKC遺伝子のアミノ酸配列のアライメントをもとに、その保存領域の混合プライマーを作製し、それらを組み合わせて、ミドリムシmRNAを鋳型に用いてReverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)を行った。得られたPCR産物をクローン化シ、その塩基配列の解析を現在行っている。その結果、プロテインキナーゼと考えられる配列を持つクローンを確認している。このキナーゼは小麦由来のアプシジン酸誘導プロテインキナーゼのキナーゼドメインの一部とアミノ酸レベルで92.5%の相同性を有していた。現在、RT-PCRフラグメントクローンの塩基配列の決定を繰り返し、PKCホモローグ遺伝子の同定を目的に研究を行っている。

Research Products

• [Publications] MICHIKO KOJIMA: "Phosphorylation/de phosphorylation of Komatsuna leat nitrate reductase in vivo in vitro in response to environmental light coudition" Physiologia Plantarum. 93. 139-145 (1995)
• [Publications] TAKASHI NANMORI: "Puritication and chardcterization of protein Kinase C from a higher plant, Brassica campestris L. ." BIOCHEM. BIOPHYS. RES, COMMUN.203. 311-318 (1994)