1995 Fiscal Year Annual Research Report
動物リン脂質中間代謝諸酵素に関する分子生物学的検討
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07457044
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
加納 英雄 札幌医科大学, 医学部, 教授 (70045475)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 伸一 札幌医科大学, 医学部, 助手 (20213209)
甲斐 正広 札幌医科大学, 医学部, 助手 (80260777)
和田 郁夫 札幌医科大学, 医学部, 講師 (40182969)
坂根 郁夫 札幌医科大学, 医学部, 講師 (10183815)
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| Keywords | ジアシルグリセロールキナーゼ / ホスファチジン酸ホスファターゼ / リン脂質 / シグナル伝達 / cDNAクローニング / プレクストリン相同部位 / 亜鉛フィンガー / EF-ハンド |
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| Research Abstract |
ジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)とホスファチジン酸ホスファターゼ(PAP)の分子生物学的検討を行っている。
1.DGK.第4番目のアイソザイムDGKδのcDNAクローニングに成功した(坂根等、JBC印刷中)。この酵素はPHドメインを持つほか、そのC-端配列がチロシンキナーゼのEPH-ファミリーと高い相同性を示す。その他の構造上の特徴から、このアイソザイムは、これまでクローン化されたαからγまでのDGKとは区別されるサブファミリーに属することが分かった。DGKαのIL-2シグナル伝達における役割を、スペインのグループとの共同研究により明らかにした(Flores et al.JBC印刷中)。T-cell receptor 活性化時に、DGKαの核マトリックスへの移行が、PI turnoverやチロシンリン酸化とは別のメカニズムで起こることを発見した(和田等、執筆中)。α、β、γの3種のEFハンドはCa^<2+>結合に対する親和性とCa^<2+>結合時のconformation変化が互いに異なることが分かった(山田等執筆中)。英国との共同研究によりDGKγのヒト染色体マッピングを行った(Curr.Eye Res.14,1041,-95).
2.PAP ブタ胸線細胞表面膜結合性の糖蛋白質である、35kDa酵素のN-端配列が、マウス培養細胞でH_2O_2により誘導される部分的cDNAクローン(HIC53)の内部配列と一致することを発見した。PCR増幅により得られたヒトとマウスのcDNAを293細胞で発現させたところ、PAP活性が検出できた。HIC53の機能は不明であり、またreading frameに誤りがあったが、この酵素の最初のクローニングに成功した(甲斐等 投稿準備中)。
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[Publications] Dada,I.: "chaperon function of calreticulin when expressed in the endoplasmic reticulleem as the membrans ancbred and stuble fows" :J.Biol.chem.270. 20298-20304 (1995)
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[Publications] Fitzgibbon,J.: "Lscalisation of the gene encoding diacylglycerol kinsse -3(DAGk3)to human chromosome 3g27-28 and mouse chromasome 16." Curr.Eye Res.14. 1041-1043 (1995)
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[Publications] Kanoh,H.: "molecular properties of enzymes involved in diacylglycerol and phosphatidate metabolism." J.Lipid Med.Cell.Signal. (印刷中).
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[Publications] Sakane.F.: "Molecular cloning of a diacylglycerol kinase isozyme with a pleckstrin homology domain and a C-terminal teil similar to those of the EPH tamily of protgaintyrosino kinases." J.Biol.Chem.(印刷中).
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[Publications] Flores.I.: "phosphatidicacid generation through IL2 ovduced α-diacylglyycerol kinase aclivation is an essential step on IL-2-mediated lymphocyte proliferation." J.Biol.Chem.(印刷中).
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[Publications] Sakane,F.: "Diacylglycerol kinase α without rinc fingers possesses the enjeyme catalytic activity" Biochem.J.(印刷中).
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[Publications] Kanoh,H.(共同執筆): "Oxford University press.London,U.K.(印刷中)" Diacylglycerol kinase in “Guide book on calcium binding proteins.
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[Publications] 加納英雄(共同執筆): "廣川書店(印刷中)" DGキナーゼ(Neuroscience 講座Vセカンドメッセンジャーと産生酵素).
