1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07457061
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| Research Institution | Oita Medical University |
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Principal Investigator |
山本 俊輔 大分医科大学, 医学部, 教授 (90040188)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
秋月 真一郎 大分医科大学, 医学部, 助手 (80159334)
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| Keywords | マクロファージ / 高発現遺伝子 / CD14 / CD156 / 遺伝子座 / トランスジェニックカウス |
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| Research Abstract |
(1).新たなMφ高発現遺伝子の解析:a)cDNAの分離:マウスのcDNA BS9、BS10、AD9、AD53、AD56、AD89、AD104、SY217および40-5URなどを分離し、塩基配列検索を進めている。AD9に対応するヒトcDNAも分離し解析中である。b)リコンビナント蛋白(RP)の分離:AD56のRPを大腸菌で発現させた。他のcDNAについても検討中である。c)抗体作成と利用:AD56のRPに対するmAbを作成中である。これらをELISAや組織分布検索に利用する。d)ゲノム遺伝子の分離:AD56のゲノム遺伝子およびプロモーター領域を分離し、構造を決定中である。(2).CD14についてa)ラットCD14(rCD14)cDNAの分離と一次構造の特徴解析した、b).rCD14および生理活性因子発現のキネティクス検索:Kupffer細胞(KC)はTNF-α以外の生理活性因子遊離機能は乏しくLPSの清掃細胞として機能することを明らかにした。c).1.トランスジェニックマウス(TM)の解析:膜型および非膜型mCD14TMを作出した。異所性CD14がLPS傷害に防御的に働くことやsolubleCD14にES阻止および促進の両面作用があることを明らかにした。2.mCD14N末端部アミノ酸71個(N71)を発現するTMの作出した。3.mCD14ノックアウトマウス(KO)の解析ではLPS刺激による末梢血単球からのCK産生は全く見られない、またLPSショックが回避された。3.CD14系の機能と制御の解析:リコンビナントmCD14(rmCD14)およびトランスフェクト細胞作成と利用:N71のrmCD14を作成しウサギ抗体(pAb)を作成した。この抗体はマウスCD14全長tfCHO-K1細胞へのFITC標識LPSの結合を阻止した。LPSによるMφ細胞株からのTNF-αの産生やin vitroにおけるLPS刺激Mφ細胞株からのTNF-α遊離を阻止した。MS2について:第VI回国際ヒト白血球分化抗原会議でMS2がCD156として承認された。a)CD156の染色体マッピング:ヒトおよびマウスCD156の染色体をFISH法で各々染色体10q26.3および7,F3-4と決定した。b)ヒトCD156の遊離型検索:ヒトCD156の遊離型cDNAおよび蛋白を分離した。細胞内部にSH3様部が見られ、この部のRPとsrc蛋白との反応を検討中である。MTP部のMTP、インヒビター・アクチベータ活性を検討中である。c)ヒトおよびマウスCD156に対するmAbの利用:PAPやFACS法でCD156組織分布を検討した。
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[Publications] A.Haziot: "Resistance to endotoxin shock and reduced dissemination of Gram-negative bacteria in CD14-deficient mice." Immunity. 4. 407 (1996)
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[Publications] H.Shinji: "Lipopolysaccharide-induced biphasic inositol 1,4,5-triphosphate response and tyrosine phosphrylation of 140-kilodalton protein in mouse peritoneal" J.Immunol. 158. 1370-1376 (1997)
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[Publications] N.Takai: "Primary structure of rat CD14 and characteristics of rat CD14,cytokine and NO synthase mRNA in mononuclear phagocyte system cells to LPS" J.Leuko.Biol.(in press).
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[Publications] 山本俊輔: "マクロファージ細胞表面上の分化抗原とその意義" 臨床免疫. 28:1. 37-48 (1996)
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[Publications] K.Yoshiyama: "CD156 (MS2 ; ADAM8) : expression,primary amino acid sequence,and gene location" Genomics. (in press).
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[Publications] M.Kataoka: "leukocyte Typing VI.White Cell Differentiation Antigens" Oxford Univ.Press ( in press),
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[Publications] S.Yammoto: "Bacterial Endotoxin Vol.IV.Recognition and Effector Mechanism" Weiley-Liss (in press),
