1996 Fiscal Year Annual Research Report
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07457262
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
上田 政和 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (50142419)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹島 薫 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50236460)
神野 浩光 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20216261)
菊池 潔 慶應義塾大学, がんセンター, 助手 (30129407)
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| Keywords | EGF / RNase / ヒト生理活性物質 / 扁平上皮癌 / 乳癌 / ミサイル療法 |
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| Research Abstract |
ATCCから購入したヒト上皮増殖因子(EGR)のcDNAと岡山大学工学部生体機能工学科妹尾助教授から供与されたヒトRNaseIのcDNAをそれぞれのベクターから切り出し、両者の遺伝子を融合した遺伝子を作製し、発現ベクターに組み込み、封入体の形で大腸菌に産生させた。封入体を可溶化させた後、in vitroでrefoldを行い生物活性を復活させた。融合タンパクのRNase活性をイ-ストRNAを基質として測定するとRNase単独のRNase活性とほぼ同程度であった。この融合タンパクをEGFレセプター数の異なる扁平上皮癌細胞株にin vitroで対数増殖期に投与して、24時間後のその殺細胞効果をMTTassay法にて検討した。その結果、RNaseやEGF単独ではほとんど殺細胞効果が認められなかったにもかかわらず、この融合タンパクでは細胞当たりのEGF受容体数に比例した殺細胞効果を示した。リコンビナントEGF・RNaseはEGF受容体への^<125>I-EGFの結合を阻害した。さらに過剰料の抗EGF受容体抗体を投与すると、濃度依存的にその殺細胞効果が減弱した。
また、細胞当たりのEGF受容体数が異なる乳癌細胞株にEGF・RNaseを投与しても、扁平上皮癌と同様EGF受容体数と比例した殺細胞効果が認められた。また、ATCCから購入したIL-2のcDNAとヒトRNaseIのcDNAを結合させ、同様の方法を用いて大腸菌にIL-2・RNaseの融合タンパクを産生させることが可能となった。
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[Publications] Kaneta Y.,et.al.: "Effects of gelonin conjugate with monoclonal antibody MSN-1 and endometrial adenocarcinoma in vitro" Oncology Report. (in press).
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[Publications] Ikeda Y.,et.al.: "Meanings of c-erb B and int-2 oncogene amplification in the patient with superficial esophageal squamous cell carcinomas" Annals of thoracic surgery. 62. 835-858 (1996)
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[Publications] Jinno H.,et.al.: "Effect of an adriamycin-immunoconjugate that recognizes the c-erb B-2 product on breast cancer cell lines" Surgery Today. 26. 501-507 (1996)
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[Publications] Tada H.,et.al.: "Human betacellulin & member of the EGF family dominantly expressed in pancrease and small intestine in fully active in a monomeric form" Growth Factors. 13. 181-191 (1996)
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[Publications] Jinno H.,et.al.: "EGF receptor-dependent cytotoxicity for human squamous carcinoma cell lines of a conjugate composed of human proeins" Life Science. 58(21). 1901-1908 (1996)
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[Publications] Jinno H.,et.al.: "EGF receptor-dependent cytotoxic effect by EGF-RNase conjugate on human cancer cell lines" Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 38(4). 303-308 (1996)
