1995 Fiscal Year Annual Research Report
G蛋白活性抑制型受容体ファミリーの発現クローニングとその情報伝達の解明
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07457549
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
植田 弘師 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (00145674)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮前 丈明 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00239435)
福嶋 伸之 横浜市立大学, 医学部, 助手 (10254161)
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| Keywords | G蛋白 / オピオイド受容体 / 情報伝達機構 / アフリカツメガエル / 卵母細胞 / クローニング |
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| Research Abstract |
本研究者らはモルモット小脳にG蛋白活性を抑制するオピオイドk-受容体活性を見い出し、平成5、6年度科研費一般研究Bの研究課題においてその受容体の発現クローニングに成功し、すでに報告した。本年度の研究においては、この情報伝達機構を十分に明らかにすることとともに、新しいG蛋白活性抑制型受容体ファミリーのクローニングを行うことを目的としている。クローニングされた受容体は従来の細胞膜7回貫通型とは異なり、見かけ上膜貫通構造を持たないが、特異的抗体を用いた組織学的研究の結果、細胞膜に局在することが明らかになった。しかし、細胞膜7回貫通型受容体とは異なり、卵母細胞において小胞体-ゴルジ体を介する膜輸送系を経ないで細胞質から膜に移行することが明らかになった。本受容体はアゴニスト刺激を受けG蛋白活性を抑制することが精製G蛋白(Gi1)との再構成実験により確認された。本受容体のG蛋白活性抑制に関わるペプチド領域を決定するために、20アミノ酸前後のペプチドを作成し、G蛋白活性に及ぼす影響を検討した。実験にはバキュロウイルス/昆虫(Sf21)細胞発現系に特定のG蛋白を過剰発現させ、[^<35>S]GTPγS結合活性を測定した。その結果、本受容体のアミノ末端から26-43までの18アミノ酸残基の領域にG蛋白活性抑制作用が認められた。この領域は両親媒性の性質を有し、G蛋白を直接活性化させるマストパランに対比できることが明らかになった。構造活性相関から、G蛋白活性抑制に必要最小限のペプチド領域を決定し、その推定cDNA配列からPCRにより、抗体作成からライブラリーのスクリーニングを試みつつある。一方、L-ドーパがラット線条体のGTPase活性を抑制することを見い出したので、同様に、卵母細胞発現クローニングを試みつつある。
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[Publications] Ueda,H. et al.: "Supersensitization of neurochemical responses by L-DOPA and dopamine receptor agonists in the striatum…" Biomedicine and Pharmacotherapy. 49. 169-177 (1995)
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[Publications] Ueda,H. et al.: "Opioid μ-and-κ-receptor mediate phospho lipasec activation through Gil in Xenopus oocytes" Mol.Brain Res. 32. 166-170 (1995)
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[Publications] Ueda,H et al: "S-μ,κ-opioid receptor mediate activation of plospho-lipase C through Gil in Xenopus oocytes" Analgesia. 1. 797-800 (1995)
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[Publications] Ueda,H et al.: "Desensitisation of S-opioid receptor in Xenopus oocytes,cos-cells and guinea pig striatal membranes" Analgesia. 1. 793-796 (1995)
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[Publications] Ueda,H et al.: "Proteinkinase C inolvement in homologous.desensitinzation of S-apioid receptor coupled to Gil-phospholipareC in Xenopus oocytes" J. of Neuro sciences. 15. 7485-7499 (1995)
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[Publications] Ueda,H et al.: "Evidence for a metabostatic opioid κ-receptor inhibiting pertussis roxin-sensitive inefabottopic glutamate…" FEBS Lett.375. 201-205 (1995)
