1996 Fiscal Year Annual Research Report

スフェロイドを用いた人工肝補助装置の肝不全ブタでの肝機能補助効果に関する研究

Research Project

Project/Area Number	07457595
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
Research Institution	Okayama University
Principal Investigator	小出典男岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	田中紀章岡山大学, 医学部, 教授 (10127566)
Keywords	肝細胞スフェロイド / 人工肝臓 / アルブミン産生 / アンモニア処理能 / 急性肝不全 / 尿素合成 / 循環培養
Research Abstract	1)一頭のブタ(体重20-25kg)より短時間で100g程度の単離肝細胞を採取する技術の開発全身麻酔下でin situ perfusionとin vitro perfusionに金属ふるいによる分別濾過法を組み合わせて、単離細胞の採取を行った。分別濾過は37°C温浴槽中で4.7-8.6-30-50メッシュの金属ふるいに細胞浮遊液を通すことにより行った。30メッシュふるいに多くの凝集塊が残ることから、これに0.05%コラ-ゲナーゼ処理を追加することにより単離細胞の回収率を改善した。この結果、灌流開始から約2-3時間で90%以上が単離状態の肝細胞を約100g回収することが可能となった。(中村正基、他:人工臓器、1996) 2)ブタ肝細胞をbioreactorとする人工肝補助装置の作成と性能評価上記で得られる単離肝細胞を、(1)microcarrier担体に接着させる(2)スフェロイド培養でスフェロイド化したのちにアガロースで被包化するの2包でバイオリアクターとしたのちに、人工肝補助装置(Shiraha H,et al.: Biotech & Bioeng,1996)のhollow fiber型カートリッジに投入して装置を作成した。上記2タイプのhollow fiberカートリッジを温度、溶存酸素などが管理されている閉鎖循環回路に接続し、細胞の生存状態、一般肝機能、蛋白合成能を比較した。一部はpotacaval shunt術を施行して肝不全に陥ったブタに接続して肝機能補助効果を検討した。48時間までの循環培養では単位細胞あたりの機能評価では両者に遜色はなかったが、(1)ではmicrocarrierへの細胞接着効率が10%程度であり、(2)の生存率30%より劣ることが判明した。(2)を肝不全ブタに接続した成績では救命率の改善には至らなかったが、アンモニア上昇抑制効果が得られた。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Sasaki S,Koide N,et al.: "Immunohistochemica study of proteoglycans in O-galactosamine-induced acute hepatitis in rats." J Gastroenterol. 31(1). 46-54 (1996)
[Publications] Yada T,Koide N,et al.: "Transferent accumulation of perisimusoidal chondroitin sulfate proteoglycans during liver development and regeneration." J Histochem Cytochem. 44(9). 969-980 (1996)
[Publications] Morita T,Hada H,et al.: "Detection of hepattitis C virus RNA in circulating immune complexes by RT-PCR." Hepaato-Gatroenterol. 43(3). 582-585 (1996)
[Publications] Muramatsu H,Xiao-jun S,et al.: "Enzyme-linked Immunoassay of Midkine and Its Application in Evaluation of Midkine Levels in the Developing Mouse Brain and in Sera from Pateints with Hepatocellular Carcinoma." J Biochem. 119(6). 1171-1175 (1996)
[Publications] Niwa T,Sakatani T,et al.: "Cytochrome p450s of isolated rat hepatocytes in spheroid and monolayer cultures." Res Commun Molecular Pathology and Pharmacology. 91(3). 372-377 (1996)
[Publications] Shiraha H,Koide N,et al.: "Improve ment of serum amino acid profile in hepatic failure with the bio-artificial liver using multicellular hepatocyte spheroids." Biotechnology & Bioengineering. 50(4). 416-421 (1996)
[Publications] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

スフェロイドを用いた人工肝補助装置の肝不全ブタでの肝機能補助効果に関する研究

Principal Investigator

小出 典男 岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)

Research Products

[Publications] Sasaki S,Koide N,et al.: "Immunohistochemica study of proteoglycans in O-galactosamine-induced acute hepatitis in rats." J Gastroenterol. 31(1). 46-54 (1996)

[Publications] Yada T,Koide N,et al.: "Transferent accumulation of perisimusoidal chondroitin sulfate proteoglycans during liver development and regeneration." J Histochem Cytochem. 44(9). 969-980 (1996)

[Publications] Morita T,Hada H,et al.: "Detection of hepattitis C virus RNA in circulating immune complexes by RT-PCR." Hepaato-Gatroenterol. 43(3). 582-585 (1996)

[Publications] Muramatsu H,Xiao-jun S,et al.: "Enzyme-linked Immunoassay of Midkine and Its Application in Evaluation of Midkine Levels in the Developing Mouse Brain and in Sera from Pateints with Hepatocellular Carcinoma." J Biochem. 119(6). 1171-1175 (1996)

[Publications] Niwa T,Sakatani T,et al.: "Cytochrome p450s of isolated rat hepatocytes in spheroid and monolayer cultures." Res Commun Molecular Pathology and Pharmacology. 91(3). 372-377 (1996)

[Publications] Shiraha H,Koide N,et al.: "Improve ment of serum amino acid profile in hepatic failure with the bio-artificial liver using multicellular hepatocyte spheroids." Biotechnology & Bioengineering. 50(4). 416-421 (1996)

[Publications] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎 薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)

小出典男岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)

[Publications] 小出典男、白羽英則、他: "人工臓器への応用、細胞外マトリックス-臨床医学への応用- 編集渡辺明治、岡崎薫" メデイカルレビュー社, 519 (1996)