1995 Fiscal Year Annual Research Report
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07458207
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Okazaki National Research Institutes |
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Principal Investigator |
池中 一裕 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 教授 (00144527)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
馬場 広子 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (40271499)
鹿川 哲史 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (50270484)
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| Keywords | ミエリンプロテオリピド蛋白質 / アンチセンスオリゴヌクレオチド / ホスホロチオエ-ト化 / 遺伝子治療 / 脱髄 / ミエリン |
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| Research Abstract |
ミエリンプロテオリピド蛋白質(PLP)は中枢神経系ミエリンの構造蛋白質であるが、我々は、最近その遺伝子領域が重複し過剰発現することにより、遺伝性脱髄性疾患が引き起こされることを証明した。これはヒトの遺伝性疾患ペリツエウスメルツバッヘル病に対応するモデルマウスである。このモデルの遺伝子治療を目的とし、PLP遺伝子の発現をアンチセンスオリゴDNA(AS-ODN)を用いて調節することを試みた。3'末端3塩基をホスホロチオエ-ト化したDNAを用い、NIH3T3細胞を用いてODNの細胞内取り込みを検討した。培養液にFITCラベルしたPLPmRNAに対するアンチセンスODNを加えて培養したところ、3時間以内に細胞質に取り込まれ核に集積し、添加12時間後でも核に存在することが確認された。この結果から、我々の系に於いてPLPアンチセンスODNがPLP転写後調節を阻害する可能性が示唆された。次に正常マウス胎生17日目(E17)の大脳より調製したオリゴデンドロサイト(OL)前駆細胞の高密度培養系に、PLPmRNAの様々な領域に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成し、濃度をふって添加し3日間培養した。開始コドンを含むAS4オリゴヌクレオチドを10μM添加した場合に形態に変化が現れた。OLのマーカーであるGalCを認識するモノクローナル抗体(O1抗体)で染色し、その形態を観察したところ、検討したアンチセンスODNのうち1つにはOLのミエリンシートの形成阻害活性が確認された。このことからPLP遺伝子の発現がアンチセンスODNによって調節できることが示唆された。すなわち、アンチセンスODNによるPLP遺伝子の発現量の調節が可能となった。今後、実際にPLPトランスジェニックマウス脳の初代培養系さらには、脳内に直接AS4を注入し、遺伝子治療を試みる。
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[Publications] Ono,J.: "Differentiation between dysmyelination and demyelination using magnetic resonance diffusional anisotropy." Brain Res.671. 141-148 (1995)
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[Publications] Ogawa,M.: "The reeler gene-associated antigen on Cajal-Retzius neurons is a crucial molecule for laminar organization of cortical neurons." Neuron.14. 899-912 (1995)
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[Publications] Nakao,J.: "Expression of proteolipd protein gene is directly associated with secretion of a factor influencing oligodendrocyte development." J.Neurochem.64. 2396-2403 (1995)
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[Publications] Ikenaka,K.: "Transgenic systems in studying myelin gene expression." Dev.Neurosci.17. 127-136 (1995)
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[Publications] 池中一裕: "神経発生とカリウムチャネル" 神経進歩. 204. 823-828 (1995)
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[Publications] Kagawa,T.: "Localization of mRNA for UDP-galactose : ceramide galactosyltransferase in the brain during mouse development." Dev.Neurosci.(in press).
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[Publications] Mikoshiba.K.: " "Gene expression in the central nervous system" Progress in Brain Res." Elsevier, 19 (1995)
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[Publications] 吉松忠憲: "臨床遺伝医学[VI]遺伝子治療と予防" 診断と治療社, 473 (1995)
