1995 Fiscal Year Annual Research Report
マウスにおける有効なコンディショナル・ジーンターゲッティング法の開発
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07458216
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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| Research Institution | Japanese Foundation For Cancer Research |
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Principal Investigator |
野田 哲生 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 部長 (10183550)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
芝 清隆 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 主任研究員 (40196415)
柴田 浩行 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 研究員 (50260071)
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| Keywords | コンディショナルジーンターゲティング / アデノウイルスベクター / loxP配列 / Cre遺伝子 / PCP2遺伝子 |
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| Research Abstract |
神経系における有効なコンディショナルジーンターゲティング法の確立のため、種々の実験を行った。その研究業績の主なるものは以下の通りである。
リコンビナントアデノウイルスによるCre遺伝子の導入・発現法の確立
SRαプロモーターの下流につないだCre遺伝子を持つリコンビナントアデノウイルスを作成した。次いでこれを2つのloxP配列にはさまれたlacZ遺伝子が、その染色体上に挿入された培養細胞に感染されることにより、Cre遺伝子発現と発現されたCre組換え酵素の活性を検討した。その結果、m.o.i30で感染を行ったところ、48時間以内に培養皿中の全て細胞でlox配列間の組換えが誘導されることを確認した。これにより、リコンビナントアデノウイルスによるCre遺伝子発現系が確立された。
神経系特異的にCre遺伝子を発現するトランスジェニックマウスの樹立
Cre遺伝子をネスチン遺伝子のプロモーター及びPCP2遺伝子のプロモーターの下流つなぎ、トランスジェニックマウスを作成した。現在、これらのマウスでCre遺伝子が神経上皮特異的(ネスチン遺伝子プロモーター)及び小脳プルキンエ細胞特異的(PCP2遺伝子)に発現していることを確認している。
標的遺伝子へのloxP配列の導入
IP3R遺伝子を始めとする数種の遺伝子のコンディショナルターゲティングを目的として、マウス染色体DNAライブラリーより遺伝子を単離し、loxP配列を持つコンディショナル・ターゲティングベクターの作成を行った。
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[Publications] Y.Uehara: "Placental defect and embryonic lethality in mice lacking hepatocyte growth factor/scatter factor" Nature. 373. 702-705 (1995)
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[Publications] K.Shiba: "Human alanyl-tRNA synthetase:conservation in evolution of catalytic core and microhelix recognition." Biochemistry. 34. 10340-10349 (1995)
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[Publications] S.Nakai: "The POU-domain transcription factor Brn-2 is required for the determination of specific neuronal lineages in the hypothalamus of the mouse." Genes.Dev.9. 3109-3121 (1995)
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[Publications] Y.Muto: "Growth retardation in human cervical dysplasia-derived cell lines by β-carotene through down-regulation of epidermal growth factor receptor." Am.J.Clin.Nutr.(in press). (1995)
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[Publications] M.Matsumoto: "Ataxia and epileptic seizure in mice lacking type 1 inositol 1,4,5-trisphophate receptor." Nature. 379. 168-171 (1996)
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[Publications] S.Sakaguchi: "Loss of cerebellar Purkinje cells in aged mice homozygous for disrupted PrP gene." Nature. (in press). (1996)
