T細胞アポトーシス異常マウスの遺伝子治療に関する実験動物学的研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07458225
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 渡辺 智正 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10100174)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山下 匡 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (30220338) ; 昆 泰寛 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (10178402)
• Keywords: マウス / Fas抗原 / lpr遺伝子 / T細胞 / 精巣 / アポトーシス / 遺伝子的多型 / 遺伝子治療

Research Abstract

MRLマウスは、リンパ腫の肥大、抗DNA抗体およびイムノグロブリンの著しい増大という特徴を持つ。その原因遺伝lprはT細胞アポトーシスFasレセプター抗原の異常であることが同定されているが、私たちはlpr遺伝子が第19染色体23番地付近にあることをマッピングしている。さらに今回lpr遺伝子周辺の精密地図をミニサテライトDNA多型を用いて作成した。これまでのところDXMit39が最も近いマーカーであり、lprとは2cMの距離にあった。遺伝子治療の基礎実験として、マウスFascDNAをEFプロモーターに接続し、発現ベクターに組み込んだ。この発現ベクターを大腸菌にトランスフェクションさせたところ、ウエスタンブロットでFas抗原を確認した。次に、発現ベクターをリポソームに包埋し、尾静脈よりマウス個体に導入したところ、少なくとも肺と肝臓に組み込まれていることをサザンブロットで確認した。MRLマウスはT細胞に特異的なアポトーシス異常を示すので、今後正常Fas遺伝子をMRLマウスに導入し、発現を確認するとともにその効果を検討する予定である。一方正常マウスは、精巣にきわめて高いFasリガンドを発現しているが,その意味は解明されていない。タネル法でMRLマウスも盛んにアポトーシスが起っていることが確認され、精巣の生殖細胞におけるアポトーシスとFasとの関連はいまだ不明である。

Research Products

• [Publications] Hayashi, M. et al: "Cytolytic activity induced by intramuscular injection of plasmid DNA expressing the nucleocapsid protein of the JHM strain of mouse hepatitis virus into C57BL/6 mice." J. Vetevinary Medical Science.58. 731-735 (1996)
• [Publications] Hayashi, T. et al: "The effects of α-phenyl-tert-butylnitrone (PBN) on copper-induced rat fulminant hepatitis with jaundice." Free Radical Biol. Med.21. 755-761 (1996)
• [Publications] Kon, Y. et al: "Detection of coagulating gland renin by hybridohistochemistry." Anat. Histl. Embryol.25. 451-460 (1996)
• [Publications] Hayashi, M. et al: "Radioresistant DNA synthesis in fibroblast cell lines derived from LEC strain rats." Mutation Research. 352. 117-121 (1996)
• [Publications] Nagao, S. et al: "Genetic mapping of the polycystic kidney gene, pcy, on mouse chromosome 9." Biochemical Genetics. 33. 401-412 (1995)