アレルゲン特異的RAST法及び食品中のアレルゲンの検出定量法の開発

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07556030
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 小川 正 徳島大学, 医学部, 教授 (80027193)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 丹尾 式希 味の素k. k., 食品総合研究所, 主任研究員 ; 坂東 紀子 徳島大学, 医学部, 教務員 (40116851) ; 木本 真順美 徳島大学, 医学部, 助手 (40108866)
• Keywords: アレルゲン / アレルゲンデイスク / モノクローナル抗体 / RAST / 大豆 / 低アレルゲン化 / 食物アレルギー

Research Abstract

本年度予定した実験計画はすべて完了し、以下の成果を得た。
1、アレルゲンの精製
アレルゲン(Gly m Bd 30K)はオイル・パッドより炭酸ナトリウム溶出法によって単一にまで精製された。
2、ペパ-デイスクの作製と実用化試験
単離下アレルゲンをCNBrで活性化した濾紙に固定し、患者血清によるRASTを試み、この結果を市販デイスクの結果と比較した。結果は、イムノブロッドによる予備検査と一致し、RAST値はその強弱を反映した。この特異的アレルゲンデイスクはGly m Bd 30K陽性患者を効率よく選別できることを示した。
3、Balb/cマウスを用いてGly m Bd 30Kを認識するF5(IgG)とH6(IgG)の2種のモノクローナル抗体の作製に成功した。
F5,H6を用いるサンドウィッチELISAを確立し、大豆食品に対して実際に使用できることを立証すると共に使用アニュアルを作製した。
以上本研究で開発した特異的アレルデンデイスク、サンドウィッチELISA法を使用してチャレンジテストに参加してもらえる被検者のスクリーニングを計画中である。

Research Products

• [Publications] M.Hessing: "Human soya bean allergenic protein and animal antigenicity profiles" Grain Legumes. No.11. 29 (1996)
• [Publications] N.Bando: "Identification of the glycocilation site of a major soybean allergen Gly m Bd 30K." Biosci.Biotech.Biochem.60. 347-348 (1996)
• [Publications] T.Ogawa: "α-Subunit of β-conglycinine, an allergenic protein recognized by IgE antibodies of soybean sensitive patients with atopic dermatitis," Biosci.Biotech.Biochem.59. 831-833 (1995)
• [Publications] H.Tsuji: "Measurement of Gly m Bd 30K,a major allergen,in soybean products by a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay." Biosci.Biotech.Biochem.59. 150-151 (1995)
• [Publications] R.Yamanishi: "Reduction of the soybean allergenicity by the formentation with Bacillus natto" Food Sci.Technol.Int.1. 14-17 (1995)
• [Publications] R.Yamanishi: "Micro-assay to measure the allergenicity of a Kunitz-type trypsin inhibitor toward Balb/c mice by using RBL-2H3 cells." Biosci.Biotech.Biochem.59. 1272-1275 (1995)