生体内電気穿孔法を用いた固形腫瘍に対する遺伝子導入法の開発

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557095
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 生塩 之敬 熊本大学, 医学部, 教授 (20028583)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 竹島 秀雄 熊本大学, 医学部, 助手 (70244134) ; 杉本 芳一 大鵬薬品工業(株), 創薬センター, 研究員 ; 西 徹 熊本大学, 医学部・附属病院, 助手 (00264309) ; 倉津 純一 熊本大学, 医学部, 助教授 (20145296) ; 佐谷 秀行 熊本大学, 医学部, 教授 (80264282)
• Keywords: 電気遺伝子療法 / 生体内電気穿孔法 / 脳腫瘍 / プラスミドDNA / lacZ遺伝子 / hMCP1

Research Abstract

・研究は昨年の当初の予定通りに進展した。
・まず、大腸菌lacZ遺伝子とhuman MCP-1遺伝子をマーカーとして、遺伝子導入法を確立した。
・生体内電気穿孔法と腫瘍栄養動脈内へのプラスミドDNA注入の組み合わせによる遺伝子導入法(電気遺伝子療法)は、非常に効率よく、移植腫瘍組織特異的な遺伝子導入を可能とした。
・動脈内に注入されたプラスミドDNAは、電気穿孔を行った部位外の組織には導入されなかった。
・生体内電気穿孔による神経学的、組織学的な副作用は認められなかった。
・Epstain-Barr Virusのepisomal replicon systemを使用することにより、導入された遺伝子は少なくとも3週間発現していた。
・ラット実験脳腫瘍内にhuman MCP-1遺伝子を導入・発現することによって、多量の免疫担当細胞が腫瘍組織内に誘導された。特に、浸出マクロファージの存在が著明であったが、予想に反してリンパ球の組織内浸潤も著明であった。
・以上の結果は、脳神経学会総会をはじめとして各種国際学会においても発表し、論文としてはCancer Researchに発表した。
・今後は、基本的な遺伝子導入法は確立されているものの、電流量、DNA量等を調整し、より安全で安定した導入法として確立する必要が有ると思われる。

Research Products

• [Publications] Jun-ichi Kuratsu: "Stimulatory effect of suramin on the proliferation of human glioma cells." Anticancer Research. 15. 1263-1268 (1995)
• [Publications] Jun-ichi Kuratsu: "The mechanism of growth-regulation of glioma cells by trapidil." Journal of Neuro-Oncology. 23. 201-206 (1995)
• [Publications] Kazuya Hamada: "Expression and alternative splicing of Pit-1 messenger Ribonucleic acid in pituitary adenomas." Neurosurgery. 38(2). 362-366 (1995)
• [Publications] Kimio Yoshizato: "Incresed monocyte chemoattractant protein-1 expression by tumor necrosis factor-α can mediate macrophage infiltration in gliomas." International Journal of Oncology. (in press).
• [Publications] Toru Nishi: "High-efficiency in vivo gene transfer using intra-arterial plasmid DNA injection following in vivo electroporation." Cancer Research. (in press).
• [Publications] Kazuya Hamada: "Expression of tissue factor correlates with grade of melignancy in human gioma." Cancer. (in press).