GTaseの生化学,遺伝学的性質解明と,そのう蝕活動性評価法への応用

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557132
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 祖父江 鎭雄 大阪大学, 歯学部, 教授 (60029973)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 南 貴洋 大阪大学, 歯学部・附属病院, 助手 (00263294) ; 藤原 卓 大阪大学, 歯学部・附属病院, 講師 (00228975)
• Keywords: Streptococcus mutans / グルコシルトランスフェラーゼ / 遺伝子クローニング

Research Abstract

Streptococcus mutansの主要な病原因子は,スクロースから付着性のグルカンを合成し,菌体の歯面付着に深く関わる酵素:グルコシルトランスフェラーゼ(GTase)である.本研究では,う蝕発生とGTaseの関係を明確するためにGTaseを分子生物学的手法を駆使して解析した.
供試菌として日本人小児より分離されたS.mutansMT8148株を用い,そのGTase遺伝子(gtfB,gtfC)がクローニングされた組換えプラスミドpSK6およびpSK14(Fujiwara et al.,1992)を用いた.
pSK6中のgtfB遺伝子の中間にエリスロマイシン耐性遺伝子を挿入し,これをMT8148株に形質転換して染色体上のgtf遺伝子との間で相同遺伝子組み替えを起こさせ,エリスロマイシン耐性変異株を分離した.抗GTase抗血清を用いたウエスタンブロットでGTaseの発現を調べところ,GTase-Iを欠失した変異株,GTase-SIを欠失した変異株およびその両者を欠失した変異株が分離された.いずれの欠失株もう蝕発生と関わりの深いスクロース依存性付着能は低下していた.
一方pSK6とpSK14に含まれるMT8148株由来gtfB,gtfC遺伝子からサブクローンプラスミドを作成した.これをテンプレートとしてジデオキシターミネーション法を用いて,DNA塩基配列の決定を開始した.現時点までにgtfB,gtfCの両遺伝子の約5kbの塩基配列がほぼ決定された.