1995 Fiscal Year Annual Research Report

DNA複製開始領域とウイルスベクターを組み合わせた遺伝子治療導入ベクターの開発

Research Project

Project/Area Number	07557147
Research Category	Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	有賀寛芳北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	上田正次 (株)ワイエスニューテクノロジー研究所, 取締役研究所長
Keywords	c-myc / DNA結合 / 転写因子 / 発現ベクター / 細胞周期
Research Abstract	我々は効率良い形質発現ベクターを作成するために、動物細胞で安定にプラスミド状態で存在するベクターの開発を行っている。そのために、種々の動物細胞遺伝子上にDNA複製開始領域を同定し、それを母体として、そこにtransに機能するタンパク質因子との相互作用を利用して高効率なベクターを検索している。 1)新たなDNA複製開始領域の同定とプラスミド化今までに、c-myc,N-myc,hsp70,免疫グロブリンH鎖遺伝子上にDNA複製開始領域を同定した。今年度更に、癌抑制遺伝子であるp53遺伝子上のDNA複製開始領域を検討したところ、上記の遺伝子群と異なって最終エキソン下流約1000-2000塩基対にDNA複製開始領域が存在した。種々の欠損変異を導入して必須領域を検討したところ、約1000塩基対を必要とし、かつp53認識配列および折れ曲がりDNA配列を必要とした。 2)c-myc遺伝子複製開始領域に結合するタンパク質 c-myc遺伝子複製開始領域,myc(H-P),配列にはC-MYC複合体が結合し、その一つの候補としてMSSPを同定し、2種類のcDNAをクローニングした。MSSPはそのC末でC-MYCのN末と結合する。また、MSSPはmyc(H-P)の1本鎖、2本鎖DNAに結合する。新たに、C-MYCそのものが、そのN末領域によりmyc(H-P)の1本鎖プラス鎖に塩基配列特異的に結合することが判明した。MSSPとはその認識配列を一部共有しており、拮抗的に作用した。 3)hsp70遺伝子上の複製開始領域に結合するタンパク質この領域もC-MYC複合体が認識することを報告している。そこで,One hybrid systemによりこの配列に結合するタンパク質cDNAをまずクローニング、次にこれらをC-MYCとの結合を指標としたTwo hybrid systemでクローニングし、2種類の新規クローンを得、解析している。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Izumi, S.: "Molecular cloning of the complementary DNA for the mouse pyruvate kinase M-2 gene whose expression is dependent upon cell differentiation." Biochim.Biophys.Acta. 1267. 135-138 (1995)
[Publications] Iwata, K.: "Diversity of sites for measles virus binding and for inactivation of complement C3b and C4b on membrane confactor protein CD46." J. Biol. Chem.270. 15148-15152 (1995)
[Publications] Taira, T.: "Autonomously replicating segment identified in the murine p53 gene contains p53 recognition sequence and bending region." Int. J. Onc.7. 115-122 (1995)
[Publications] Takahashi, C.: "Involvement of PIM-1 in DNA fragmentation in mous NS-1-derived cells." Biochem Biophys. Res. Commun.215. 538-546 (1995)
[Publications] Manabe, A.: "Transcriptional repression activity of N-myc protein requires phosphorylation by MAP kinase." Biochim Biophys. Res. Commun.(in press).
[Publications] 有賀寛芳: "神経細胞の増殖・分化に関与するmyc遺伝子とアポトーシス" 学術月報. 48. 1036-1041 (1995)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

DNA複製開始領域とウイルスベクターを組み合わせた遺伝子治療導入ベクターの開発

Principal Investigator

有賀 寛芳 北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)

Research Products

[Publications] Izumi, S.: "Molecular cloning of the complementary DNA for the mouse pyruvate kinase M-2 gene whose expression is dependent upon cell differentiation." Biochim.Biophys.Acta. 1267. 135-138 (1995)

[Publications] Iwata, K.: "Diversity of sites for measles virus binding and for inactivation of complement C3b and C4b on membrane confactor protein CD46." J. Biol. Chem.270. 15148-15152 (1995)

[Publications] Taira, T.: "Autonomously replicating segment identified in the murine p53 gene contains p53 recognition sequence and bending region." Int. J. Onc.7. 115-122 (1995)

[Publications] Takahashi, C.: "Involvement of PIM-1 in DNA fragmentation in mous NS-1-derived cells." Biochem Biophys. Res. Commun.215. 538-546 (1995)

[Publications] Manabe, A.: "Transcriptional repression activity of N-myc protein requires phosphorylation by MAP kinase." Biochim Biophys. Res. Commun.(in press).

[Publications] 有賀寛芳: "神経細胞の増殖・分化に関与するmyc遺伝子とアポトーシス" 学術月報. 48. 1036-1041 (1995)

有賀寛芳北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)