薬剤排出蛋白阻害剤スクリーニング系の開発

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557150
• Section: 試験
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 山口 明人 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (60114336)
• Keywords: 多剤排出蛋白 / 阻害剤 / スクリーニング / 多剤耐性 / MexAB / NorA / 緑膿菌 / 黄色ぶどう球菌

Research Abstract

S.aureusのNorA産生株、P.aeruginosaのMexA/B高度発現株をそれぞれ確立し、非産生株とのセットでキノロン剤およびβ-ラクタム剤に対する耐性をMICを指標として測定する系を確立した。この系を用いて、山之内製薬との共同で、阻害剤候補化合物のスクリーニングを行った。約6万種類の化合物をチェックしたが、1個だけヒットする化合物が得られた。この確率は、通常の酵素阻害剤のスクリーニングに比べると異常に低い確率である。細菌の多剤排出蛋白は非常に阻害されにくい蛋白であり、その克服が大変難しいことを示唆している。今後、さらに多数の化合物を検索すると共に、このヒット化合物の阻害機構について検討していきたい。

Research Products

• [Publications] T.Kimura: "Asp-285 of the Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter of Escherichia coli is Essential for Substrate Binding." FEBS Letters. 388. 50-52 (1996)
• [Publications] E.Fujihira: "Transmembrane Glutamic Acid Residues Play Essential Roles in the Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter of Staphylococcus aureus." FEBS Letters. 391. 243-246 (1996)
• [Publications] A.Yamaguchi: "His 257 Is a Uniquely Important Histidine Residue for Tetracycline/H^+ Antiport Function but Not Mandatory for Full Activity of the Transposon Tn10-Encoded Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter." Biochemistry. 35. 4359-4364 (1996)
• [Publications] Y.Someya: "Mercaptide Formed between the Residue Cys70 and Hg^<2+> or Co^<2+> Behaves as a Functional Positively Charged Side Chain Operative in the Arg70->Cys Mutant of the Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter" Biochemistry. 35. 9385-9391 (1996)
• [Publications] T.Kimura: "Determination of a Transmembrane Segment Using Cysgteine-Scanning Mutants of Transposon Tn10-Encoded Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter." Biochemistry. 35. 15896-15899 (1996)
• [Publications] T.Kimura: "Membrane topology of the Transposon 10-Encoded Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter as Studied by Site-Directed Chemical Labeling." The Journal of Biological Chemistry. 272. 580-585 (1997)
• [Publications] 山口 明人: "細菌薬剤排出蛋白の分子機構" バイオサイエンスとインダストリー. 54. 19-23 (1996)