糖鎖認識デバイスを活用した細胞移植におけるナビゲーション法の開発

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557154
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 今井 康之 東京大学, 薬学部, 助手 (80160034)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山岡 隆 住友製薬, 総合研究所, 主任研究員
• Keywords: 細胞移植 / 細胞交通 / MMGL / レクチン / 実験的肺転移 / 養子免疫療法

Research Abstract

細胞移植は、臓器移植と共に医学的な検討が進められるべき分野の一つであるが、移植した細胞をいかに標的臓器あるいは腫瘍組織へターゲッティングするかという問題が共通の課題である。糖鎖を認識するタンパク質(レクチン)と糖鎖リガンドとの特異的接着現象が生理的な細胞のターゲッティングに重要な役割を演じていることがわかってきた。本研究では、抗腫瘍性マイクロファージ上に発現が認められる細胞膜貫通型のカルシウム型レクチンMMGLを糖鎖認識デバイスとして活用し、細胞を腫瘍局所に人為的にターゲッティングする方法および結果の解析法の開発を目指し、以下の結果を得た。
糖鎖認識デバイスを組み込んだ免疫担当細胞のクローンを作製した。すなわち、MMGLのcDNAを発現ベクターpCEP-4に組み込み、IL-2依存性細胞傷害性T細胞CTLL-2にトランスフェクトし恒常的なトランスフェクタントCTL-MLを取得した。我々の作製したMMGLに対するラットモノクローナル抗体LOM-14を用いて、MMGLの発現を証明した。
細胞膜に取り込まれる蛍光物質DiIでCTL-MLを標識し、マウス卵巣癌細胞OV2944-HM-1の肺転移結節をあらかじめ作らせておいたマウスに尾静脈より移入した。経時的にマウスを屠殺し、転移結節を含む肺の連続凍結切片を作製した。顕微鏡下切片内の正常肺組織と転移結節の面積を測定し、各々の部位へ到達した蛍光陽性の細胞数を蛍光顕微鏡下計数した。単位面積あたりの蛍光陽性細胞数を腫瘍部および肺組織に分けて求め、その比率を細胞集積性のパラメーターとして定義した。対照として、空のベクターをトランスフェクトしたCTLL-2を用いた。この実験を繰り返し行い、細胞集積性を統計的に比較した。その結果、対照と比べ、MMGLを発現させたCTL-MLにおいて、転移結節における細胞集積性が高いことが明かとなった。

Research Products

• [Publications] Sakamaki, T.: "Enhancement in accessibility to macrophages by modification of mucin-type carbohydrate chains on a tumor cell line:role of a C-type lectin of macrophages." J. Leukoc. Biol.57. 407-414 (1995)
• [Publications] Kimura, T.: "Galcium-dependent conformation of mouse macrophage calcium-type lectin. Carbohydrate binding activity is stabilized by an antibody specific for a calcium-dependent epitope." J. Biol. Chem.270. 16056-16062 (1995)
• [Publications] Imai, Y.: "Restricted expression of galactose/N-acetylgalactosamine-specific macrophage C-type lectin to connective tissue and to metastatic lesions in mouse lung." Immunology. 86. 591-598 (1995)