蛋白抗原のT細胞エピトープを同定する為の新しい方法

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557228
• Research Institution: St. Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 加藤 智啓 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 助手 (80233807)
• Keywords: T細胞エピトープ / MHCクラスII / ペプチドライブラリー

Research Abstract

抗原分子のT細胞エピトープ同定はワクチンの開発や自己免疫疾患の病因解明に避けて通れない重要な課題である.T細胞エピトープ同定の為に既に2,3の方法が使われているが満足のいくものはない.特に抗原が未知の場合、全く方法が無いのが現状である。我々は最近使われ始めたランダムペプチドファージライブラリーに独創的な改良を加え、ランダムペプチドをMHC分子と共にファージ表面に発現させ,T細胞レセプターとの結合するランダムペプチドを直接スクリーニングすることでこれを克服することを計画した。MHCクラスII分子を一本鎖蛋白としてファージ上に発現させるために、先ずMHC分子と同じスーパーイムノグロブリンファミリーである抗体で試験的に実験を行い、抗体の可変領域であるVH鎖とVL鎖の遺伝子をPCR法にて増幅した後、リンカー(DDAKK)^4をコードする遺伝子(作成法は報告済み)を挟んで一本鎖にして、ファージのマイナ-コートプロテインをコードする遺伝子に連結した。そして、抗体活性があることを確認した(Mol. Biol. Reports, in press)。これをMHCクラスII分子に応用し、α鎖及びβ鎖の細胞外ドメインの遺伝子をPCR法にて増幅した後、同じリンカー(DDAKK)^4をコードする遺伝子を挟んで一本鎖にして、ファージのマイナ-コートプロテインをコードする遺伝子に連結した。本来の立体構造を持っているかどうかは現在抗クラスII抗体等を用い確認中である。一方、12アミノ酸からなるランダムな配列のペプチドをコードするDNAはすでに作成しており、組換えMHCクラスII分子が作成され次第スクリーニングを行うことができる。

Research Products

• [Publications] Yamamoto K., Masuko K., Takahashi S., Ikeda Y., Kato T., Mizushima Y., Hayashi K., Nishioka K.: "Accumulation of distinct T cell clonotypes in human solid tumors." J. Immunol.154. 1804-1809 (1995)
• [Publications] Ikeda Y, Masuko K, Nakai Y, Kato T, Hasunuma T, Yoshino S, Mizushima Y, Nishioka K, Yamamoto K.: "High frequencies of identical T cell clono-types in synovial tissues of rheumatoid arthritis patients suggest the occur-rence of common antigen-driven immune responses" Arthritis Rheum.(1996)
• [Publications] Masuko, K., Kato, T., Hagihara, M., Tsuchida, F., Takemoto, Y., Izawa, K., Kato, T., Yamamoro, S., Mizushima, Y., Nishioka, K., Tsuji, K., Yamamoto, K.: "Stable clonal expansion of T cells induced by bonemarrow transplantation" Blood.87. 789-799 (1996)
• [Publications] Komagata Y., Masuko K., Tashiro F., Kato T., Ikuta K., Nishioka K., Miyazaki J., Yamamoto K.: "Clonal Prevalence of T cells infiltraing into the pancreas of prediabetic NOD mice" Int. immunol. (in press).
• [Publications] T. Hoger, M. Tokuyama, K. Yonamine, K. Hayashi, K. Masuko-Hongo, Tomohiro Kato, T. Kobata, Y. Mizushima, K. Nishioka, K. Yamamoto: "Time course analysis of α+β+T cell clones during normal pregnancy" Eur. j. Immunol.(in press).
• [Publications] Tomohiro Kato, Y. Ikeda, Z-P Zong, H. Sasakawa, M. Kurokawa, K. Masuko, R. Igarashi, Y. Nizushima, K. Nishioka, K. Yamamoto: "Charactrerization of T cell receptor β chains of accumulating T cells in skin allografts in mice" Transplantation. (in press).
• [Publications] 加藤 智啓: "分子レベルの自己免疫疾患" 山本一彦, 15 (1995)
• [Publications] 加藤 智啓: "疾患別最新処方" 矢崎義雄, 2 (1995)