照射効果モニターのための新しい単クローン抗体の作製

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557237
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 鈴木 紀夫 東京大学, 医学部(医), 教授 (10010050)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 平野 和也 東京大学, 医学部(医), 助手 (80251221) ; 伊藤 正光 東京大学, 医学部(医), 助手 (80176362) ; 酒井 一夫 東京大学, 医学部(医), 講師 (40153837)
• Keywords: MOLT4白血病細胞 / 放射線誘導蛋白 / 抗ペプチド抗体 / SET / 細胞死

Research Abstract

平成7年度は特に以下の2点につき報告する。
1)MOLT4白血病細胞を主に用いてp41タンパク質を精製、アミノ酸配列の決定等を行なった。精製は主としてO′Farrellの二次元電気泳動を用い、ク-マシ-ブルーまたは銀染色により照射後のスポットp41について、ゲルより切りだしたスポットを集め、エンドペプチダーゼ消化後、アミノ酸配列を決定した。その後ホモロジー検索の結果、白血病細胞の癌関連遺伝子SETと高い相同性をもつことが明らかになった。
2)ポリクローナル抗体の作製。決定された配列をもとに、合成ペプチドを作製し、この合成ペプチドを抗原とし家兎にてポリクローナル抗体を作製中である。得られたポリクローナル抗体を用いてWestern blotting解析を行ない、p41のスポットを特異的に染色するか、また他の染色スポットの有無について解析する予定である。
またポリクローナル抗体作製後(次年度以降)、
1)抗体を用いてp41の照射後の発現の時間的推移、照射線量との関連性、細胞内局在、各種細胞・組織分布について解析する予定である。
2)また抗p41単クローン抗体の作製および、p41の生化学的機能解析を行なうために、nativeなp41蛋白の精製を各種クロマトグラフィーを用いて行ないつつある。
3)単クローン抗体作製後、免疫沈降法、病理組織染色等によりp41の生物学的特性、細胞内局在、および各種細胞、組織分布や機能の解析をすすめ、またp41の意義づけおよび有用性の解析をヌードマウス腫瘍を含めて行なう予定である。

Research Products

• [Publications] Sakata, K.: "Further application and evaluation of critical cell number and modifying factors in rario-curability of multicellular spheroids." J. Radiat. Res.36(1). 17-30 (1995)
• [Publications] Morimatsu, A.: "Identifibation and characterization of a protein appeared after X-irradiation in human T cell leukemia." J. Radiat. Res.(in press). (1996)
• [Publications] Itoh, M.: "Enhancement of heat sensitivity in FSA1233 tumor by H7" Radiation Reseach. Vol. 1. 399-399 (1995)
• [Publications] Sakai, K.: "Modification of heat sensitivity of chiness hamster V79 cells by an inhibitor of protein kinase C" Radiation Reseach. Vol. 1. 399-399 (1995)
• [Publications] Hirano, K.: "MUCl mucin as a radiation-inducible marker in colon carcinoma cells and its enhancement by TNF β" Radiation Reseach. Vol. 1. 226-226 (1995)
• [Publications] Takeuchi, K.: "cDNA cloning of mouse VLA-3 αsubunit" J. Cellular Biochemistry. 57. 371-377 (1995)
• [Publications] 鈴木 紀夫: "癌の放射線療法'95" 大川編(T. Okawa)篠原出版, 989 (1995)