筋ジストロフィー責任遺伝子のmRNA特異的増幅法による遺伝子診断法の確立

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557308
• Research Institution: National Institute of Neuroscience, NCNP
• Principal Investigator: 荒畑 喜一 国立精神・神経センター, 神経研究所・疾病研究第一部, 部長 (30053325)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宋 泯東 国立精神, 神経センター・神経研究所・疾病研究第一部, 研究員 ; 長谷 麻子 国立精神, 神経センター・神経研究所・疾病研究第一部, 研究員
• Keywords: 筋ジストロフィー / 顔面肩甲上腕型 / 遺伝子診断 / LA-PCR法

Research Abstract

本研究計画では、三大筋ジストロフィーの一型である顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー(FSHD)の原因遺伝子部分をクローン化し、その構造と機能を明らかにすることによってFSHDの新しい遺伝子診断法の確立をはった。これまでの予備的研究結果から、我々はFSHD関連遺伝子部分に、ホメオティク遺伝子を得ている。とくに特異的で迅速な遺伝子診断の確立と、病因の解明を図る目的でLA-PCR法とサザンブロット解析を実施した。具体的には、(1)コスミドクローンC51,プラスミドpSM1について制限酵素マッピング及びサブクローン化を行い、FSHD関連EcoRl断片に特異性が高く反応する新しいブローブを作製し、(2)FSHD症例のゲノムDNAについてEcoRl,HindIIIの二重消化による断片のゲノムライブラリーを作製して、新しいプローブpFR1を用い、PCR法、コロニハイブリダイゼィション法、サザン法でスクリーニングを行い、(3)FSHDの責任遺伝子とされる3.3kb kpn I反復配列ユニットの特異的増幅をLA-PCR法で行い(サザンブロットで確認)、迅速な遺伝子診断法を確立した。現在、各組織cDNAを用いホメオボックスの発現を調べている。なお、ホメオドメイン配列について発現ベクターを用い、フュージョンタンパクを得た。

Research Products

• [Publications] Lee JH et al.: "Characterization of a tandemly repeated 3.3-kb kpnl unit in the facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) gene region on chromosome 4q35." Muscle Nerve. Suppl 2. S6-S13 (1995)
• [Publications] Lee JH et al.: "Cloning and mapping of a very short (10-kb) EcoRl fragment associated with facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD)." Muscle Nerve. Suppl 2. S27-S31 (1995)
• [Publications] Arahata K et al,: "Inflammatory response in facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) : Immunocytochemicalane genetic analyses." Muscle Nerve. Suppl 2. S56-S66 (1995)
• [Publications] Goto K et al,: "DNA rearrangements in Japanese facioscapulohumeral muscular dystrophy patients : Clinical correlations." Neuromusc Disord. 5. 201-208 (1995)
• [Publications] 後藤加奈子,他: "顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー" 臨床神経学. 35. 1416-1418 (1995)
• [Publications] 宋泯東,他: "顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーのgene hunting" 脳神経. 48. 307-313 (1996)
• [Publications] 宋泯東,他: "顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーの分子遺伝学" Brain Medical. 8. 49-53 (1996)