1996 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト細胞表面特異的ヒト抗体の遺伝子工学的製造と応用
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07557318
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| Section | 試験 |
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
熊谷 泉 東北大学, 工学部, 教授 (10161689)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内川 誠 日本赤十字社中央血液センター, 検査部, 検査課長
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| Keywords | ヒト赤血球 / 抗体 / 繊維状ファージ / 血液型 / 血球検査 |
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| Research Abstract |
ヒト細胞表面に特異的なヒト由来モノクローナル抗体は、細胞機能の制御、病態検査等の医薬品としての利用に大きな可能性を秘めているが、特異抗体産生ハイプリド-マの調製の困難さ故にその供給は限られている。最近、繊維状ファージの一つのコートタンパク質上にヒトゲノム中から抗体可変領域だけをPCRで取り出し提示する"ファージ抗体"の系が開発されている。本研究においては、ヒト赤血球をモデル細胞として、ヒト細胞表面特異的ヒト抗体を先の"ファージ抗体"の系を更に改良し、ヒト抗体を系統的に同定作成する系を確立することを目的としている。既に初年度において、研究分担者である内川により既に調製されているヒト抗Rh抗体産生ヘテロハイブリドーマまたはヒトリンパ球のmRNAから作製したファージ抗体のライブラリーから、ヒト赤血球のRh抗原の一つであるRh(D)抗原に対するファージ抗体の選別に成功した。今年度はこのファージ抗体の一本鎖可変領域(scFv)を、大腸菌の発現系で大量調製しその抗原特異性を詳細に解析した。大腸菌の発現系は、T7-プロモーター、pelBのシグナルペプチド領域を利用し、検出と精製を容易にするためにsFv断片カルボキシル末端にc-myc及び6個のHisからなる目印(tag)が挿入されている(熊谷)。調製したscFvを用いて、二次抗体として抗c-myc抗体の共存下でヒト赤血球凝集活性を測定した。種々のRh型ヒト赤血球124検体に対する凝集活性を調べた所、Rh(D)抗原に対して厳密な特異性を有し、充分高い凝集活性を示すことが明らかとなり、実際の血液検査薬としての有効性を示すことができた(内川)。
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[Publications] K. Tsumoto: "Role of Tyr residues in the Contact Region of Anti-lysozyme Monoclonal Antibody HyHEL10 for Antigen Binding" J. Biol. Chem.270. 18551-18557 (1995)
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[Publications] K. Maenaka: "Dissection of protein-carbohydrate interactions in mutant hen egg-white lysozyme complexes and their hydrolytic activity" J. Mol. Biol.247. 281-293 (1995)
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[Publications] K. Maenaka: "A stable phage-display system using a phagemid vector-phage display of HyHEL10 single-chain Fv" Biochem. Biophys. Res. Commun.218. 682-687 (1996)
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[Publications] Y. Li: "A study of antibody-antigen interaction through site-direted mutagenesis of the VH region of a phage-antibody fragment" Protein Engineering. 9. 1211-1217 (1996)
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[Publications] K. Tsumoto: "Role of Salt Bridge Formation in Antige-Antibody Interaction" J. Biol. Chem.271. 32612-62616 (1996)
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[Publications] H. Ueda: "Open sandwich ELISA : A novel immunoassay based on the interchain interaction of antibody variable region" Nature biotech.14. 1714-1718 (1996)
