組換え受容体と化学発光を用いた甲状腺刺激ホルモン受容体抗体のアッセイ系の開発

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557353
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 小杉 眞司 京都大学, 医学研究科, 助手 (50252432)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 笹嶋 政昭 チバコーニングダイアグノスティクス 株式会社, 開発部開発課, 研究員 ; 須川 秀夫 京都大学, 医学研究科, 講師 (70162857) ; 赤水 尚史 京都大学, 医学研究科, 助手 (20231813)
• Keywords: 組み替え受容体 / 化学発光 / CHO細胞 / tagged receptor / 甲状腺刺激ホルモン受容体 / 受容体自己抗体 / モノクローナル抗体 / 疎水性クロマトグラフィー

Research Abstract

現在のTBII(甲状腺刺激ホルモン結合阻害イミュノグロブリン)測定系に放射性同位元素を用いない化学発光の系を導入し、甲状腺膜ではなくリコンビナントTSHR(甲状腺刺激ホルモン受容体)蛋白を用いた、より特異的、簡便、高感度な方法を導入するための基礎検討を継続して行った。リコンビナイトTSHR蛋白として、バクテリア、バキュロヴァイラス、動物細胞によって、受容体全長及び細胞外領域のみの発現を試みた。バクテリア、バキュロヴァイラスで発現させた蛋白は、多量に採取できたがいずれも付加される糖及び3次元構造がnativeな受容体とは異なっており、実際のアッセイに利用することは困難であると考えられた。動物細胞(CHO 細胞など)にトランスフェクションさせることにより発現された受容体は、機能的にも構造的にもnativeと考えられた。特に、細胞外領域のみを分泌型受容体として取り出し得ることが明らかとなった。これは、受容体の大量生産と取り扱いの上で極めて有利である。さらにヒスチジンタッグやFLAGタッグを受容体N末端に挿入することにより、受容体の高度な精製が可能であることも明らかとなった。
疎水性クロマトグラフィーを行うことにより、AE(アクリジウムエステル)標識TSHの特異性が向上したが、受容体への結合親和性がやや低下し、改善の余地があることが明らかとなった。
測定の標準化に用いるTBII活性陽性モノクローナル抗体を、患者Bリンパ球をEBウイルスを用いてトランスフォームすることにより数種類得ることに成功した。

Research Products

• [Publications] Yoshida A, Sasaki N, Mori A, Taniguchi S, Mitani Y, Ueta Y, Hattori K, Sato R, Hisatome I, Mori T, Shigemasa C, Kosugi S.: "Different electrophysiological character of I^-,CIO_4^- and SCN^- in the transport by Na^+/I^- svmporter." Biochem Biophys Res Commun. 231. 731-734 (1997)
• [Publications] Kosugi S, Matsuda A, Hai N, Aoki N, Sugawa H, Mori T: "Aspartate-474 in the first cytoplasmic loop of the thyrotropin receptor is crucial for receptor activation." FEBS Lett. 406. 139-141 (1997)
• [Publications] Mori T, Sugawa H, Kosugi S, Ueda M, Hai N, Matsuda A: "Recent trend in the management of Graves' hyperthyoidism in Japan : opinion survey results,especiallv on the combination of therapy of antithyroid drug and thyroid hormone." Endocr J. 44. 509-517 (1997)
• [Publications] Mori T, Sugawa H, Kosugi S, Ueda M, Inoue D, Akamizu T.: "Effectiveness of a short-term steroid treatment on the reduction in goiter size in antithyroid drug-treated patients with Graves'disease" Endocr J. 44. 575-580 (1997)
• [Publications] Matsuda A, Kosugi S: "A homozygous missense mutation of the sodium/iodide symporter gene causing iodide transport defect." J Clin Endocrinol Metab. 82. 3966-3971 (1997)
• [Publications] Muller J, Gondos B, Kosugi S, Mori T, Shenker A: "Severe testotoxicosis phenotype associated with a strongly activating mutation of the lutropin receptor." J Med Genet. (in press). (1998)
• [Publications] Kosugi S, Mori T, Shenker A: "An anionic residue at position 564 is important for maintaining the inactive conformation of the human lutropin/choriogonadotropin receptor." Mol Pharmacol. (in press). (1998)
• [Publications] Sugawa H, Ueda M, Matsuda A, Hai A, Yoshida A, Kosugi S: "Lack of measurable maximal capacity of inorganic iodide pool in non-thyroid cell." Thyroidology. (in press.). (1998)
• [Publications] Kosugi S, Sugawa H, Mori T: "Epitope analvsis of the thyrotropin receptor,1997." Mol Cell Endocrinol. 128. 11-18 (1997)
• [Publications] 小杉眞司: "TSH受容体の構造と機能・抗原部位。" Mebio. 14. 84-91 (1997)
• [Publications] 小杉眞司, 松田彰, 須川秀夫, 森 徹: "甲状腺機能に対する喫煙産物の影響-ナトリウム・ヨードシンポーターに対する影響-" 平成8年度喫煙科学研究財団研究年報. 574-578 (1997)
• [Publications] 小杉眞司: "TSH受容体異常症。" 医学のあゆみ 別冊(Basedow病と橋本病). 17-21 (1997)
• [Publications] 小杉眞司: "高度先進医療における遺伝子診断。" 遺伝子医学. 1. 80-84 (1997)
• [Publications] 小杉眞司, 森徹: "TSH受容体。" 生体の科学. 48. 460-462 (1997)
• [Publications] 小杉眞司, 井上大輔, 須川秀夫: "糖蛋白ホルモン受容体異常の遺伝子診断。" 公益信託臨床病理学研究振興基金研究報告書. 10. 21 (1997)
• [Publications] 小杉眞司: "ヨード濃縮障害におけるヨードトランスポータ遺伝子変異。" Molecular Medicine. 35. 96-102 (1998)
• [Publications] 小杉眞司: "甲状腺のヨード摂取機構。" 遺伝子医学. 2. 63-67 (1998)
• [Publications] 小杉眞司: "TSH受容体遺伝子変異による疾患。" 日本臨床。別冊(受容体研究の進歩と臨床). (印刷中). (1998)
• [Publications] 小杉眞司, 森徹: "家族性思春期早発症。" Annunal Review 内分泌・代謝1997. 54-61 (1997)
• [Publications] 小杉眞司, 森徹: "受容体機能とその評価法:TSH受容体" 日本臨床 特別号(現代臨床機能検査). 480-482 (1997)