悪性グリオーマにおけるケモカイン遺伝子導入発現レトロウイルスベクターの開発

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07557359
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 山下 純宏 金沢大学, 医学部, 教授 (90026948)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 天沼 宏 金沢大学, 理化学研究所, 主任研究員 ; 山口 和男 金沢大学, 遺伝子実験施設, 施設長教授 (00019879)
• Keywords: retrovirusvector / specificity / chimera / env / EGF / glioma

Research Abstract

悪性グリオーマにおいて効率良く遺伝子発現を行うレトロウイルスベクターの開発を検討した。EGF受容体、MBP、calmodulin-type2、GFAP、およびCMV遺伝子プロモーターを挿入しluciferaseをreporter geneとする各種ウイルスベクターゲノムを構築した。これらのウイルスベクターゲノムをヒト神経膠腫細胞株U87MGおよびU251MGなどにtransientに導入し、プロモーター間でのグリオーマ細胞への指向性および発現効率を比較検討した。EGF受容体、calmodulin-type2にて特異性が認められたが発現効率はCMVに比べて低く、さらに複数のEGF受容体遺伝子enhancer部分を様々な組み合わせにて挿入し、発現効率の改善について検討中である。
さらに感染段階での特異性の検討のため、EGF chimera envの構築を行った。クローン化されたhuman EGFのcDNA(ATCC number:59957)を鋳型として得たEGF 53a.a.のinsertをMo-MuLV envのBstEll siteとBstXl siteの間に挿入した。キメラenvはCMVプロモーター(pcDNA1/Amp vector)でecotropic packaging cell: BOSC23にlacZもしくはneo発現ベクターゲノムと共に導入してウイルスベクターを回収した。現在、A431細胞などを標的細胞として感染能を検討中である。

Research Products

• [Publications] Kawamura T: "Whole-cell analysis of NGK2(mKv3.1a)K+ channels stablv expressed in mouse fibroblast cells" Neuroscience Letters. 197. 164-166 (1995)
• [Publications] Kubota T: "Clear cell(glycogen-rich)meningioma with special reference to spherical collagen deposits" Brain Tumor Pathol. 12. 53-60 (1995)
• [Publications] Tachibana O.: "Expression of Fas/APO-1 during the progression of astrocytomas" Cancer Res. 55. 5528-5530 (1995)
• [Publications] Hasegawa M.: "Multicentric infantile myofibromatosis in the cranium" Neurosurgery. 36. 1200-1203 (1995)
• [Publications] Higashi S.: "Occipital dermal sinus associated with dermoid cyst in the fourth ventricle" AJNR. 16. 945-948 (1995)
• [Publications] Fujisawa H: "Inducible nitric oxide synthase in a human glioblastoma cell line" J Neurochem. 64. 85-91 (1995)