血管内皮依存性血管弛緩物質NOの血流依存性合成放出動態計測・評価システム

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07558260
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Kawasaki Medical School
• Principal Investigator: 小笠原 康夫 川崎医科大学, 医学部, 講師 (10152365)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 望月 精一 川崎医療短期大学, 医用電子技術科, 講師 (60259596) ; 矢田 豊隆 川崎医科大学, 医学部, 助手 (00210279) ; 辻岡 克彦 川崎医科大学, 医学部, 教授 (30163801) ; 梶谷 文彦 川崎医科大学, 医学部, 教授 (70029114)
• Keywords: 血管内皮由来弛緩因子(EDRF) / 一酸化窒素(NO) / 微細NO電極 / ずり速度

Research Abstract

【NO計測を障害するノイズの排除】
電気的ノイズを遮蔽するために測定装置・潅流装置全てを遮蔽用シールド内に設置した。最高感度として1pA(約1nM NOに相当)を確認した。
【NO電極のキャリブレーション】
電極のキャリブレーションは、NO生成標準物質のS-nitroso-N-scetylpenicillamine (SNAP)溶液にて行った。SNAP濃度70〜570μMの範囲で計測電流値との間によい直線性(r^2=0.99)を得ることができ、以下に示す通り生理的NO濃度を十分な精度と再現性をもって検出できることを認めた。
【血管壁内一酸化窒素濃度の計測】
予備実験対象としてイヌ摘出大腿動脈を用いて検討した。マイクロマニピュレータを用いて微細NO電極(直径:100μm)をNOの作用部位である血管壁中膜平滑筋層に刺入し、Krebs-Henseleit緩衝溶液(NO合成酵素の基質であるL-arginine50μMを含む)を潅流速度を広範囲で変化させて(<30ml/min) NO濃度を測定した。
検討した潅流速度範囲全体で潅流速度の増加に比例してNO生成量(測定電流の定常値)が増大し(max:約50pA ; r^2=0.77, p<0.05)、NO生成量が、潅流速度(ずり速度)に依存することを認めた。さらに、NO合成酵素(NOS)阻害剤のL-NA、L-NMMAの投与により計測電流値が減少し、NOの基質のL-arginine投与により回復したことから本NO電極が選択的にNOを検出していることを認めた。

Research Products

• [Publications] 小笠原泰彦: "冠循環-マクロからミクロにいたる循環動態-" 計測 診断技術研究会報告書I. 55-64 (1995)
• [Publications] 望月精一: "微細一酸化窒素電極による臓器内一酸化窒素の計測" 医科器械学. 66. 24-28 (1996)
• [Publications] Seiichi Mochizuki: "Direct nitric oxide measurement in arterial wall by nitric oxide sensing electrode" Circulation (suppl.). 92. I-108 (1995)
• [Publications] Tokunori Yamamoto: "In vivo visualization of human intra-renal microcirculation with dye observed by a novel needle-type CCD videomicroscope" Journal of American Society of Nephrology (suppl.). 6. 688 (1995)
• [Publications] 梶谷文彦: "Shear Stressと微小循環-冠微小循環-" 現代医療. 27. 89-97 (1995)
• [Publications] 望月精一: "微細NOセンサーの臓器内NO計測への適用性の検討" 医科器械学(suppl.). 65. 8-9 (1995)