1996 Fiscal Year Annual Research Report

卵胞退行における顆粒層細胞のアポトーシスの役割とその制御機構

Research Project

Project/Area Number	07660379
Research Institution	KYOTO UNIVERSITY
Principal Investigator	眞鍋昇京都大学, 農学部, 助教授 (80243070)
Keywords	アポトーシス / 顆粒層細胞 / 卵丘細胞 / 卵母細胞 / 卵胞閉鎖 / プロテアーゼ / モノクロナール抗体 / 細胞膜糖蛋白受容体
Research Abstract	哺乳類卵巣では排卵に際して発育を開始する卵胞の99%以上が選択的に死滅し、ごく一部のみが排卵にいたる。しかしこの生死を決定する分子制御機構は未だ不明な点が多い。この分子制御機構を解明する研究の一環として、顆粒層細胞にアポトーシスを誘導する分子、特に細胞表面に発現している受容体分子の同定とその制御機構を解明することを目的として本研究を進めた。実体顕微鏡下に健常と退行卵胞を識別でき、かつ卵胞を構成する細胞を容易に単離できるブタ卵胞を材料として用いた。健常卵胞の顆粒層細胞表層に存在し、退行の進行とともに消失する糖鎖の結合した膜蛋白を特異的に認識するモノクロナール抗体を作成できた。この抗体を培養顆粒層細胞の培養液中に添加することでアポトーシスを誘導できるので、この抗体が認識している膜糖蛋白はアポトーシスシグナル受容体のひとつであることが分かった。さらにこの細胞死受容体の細胞質内下流にはインターロイキンβ1転換酵素様プロテアーゼがアポトーシスシグナルの伝達に支配的に関与していることが阻害剤を用いた実験から確認された。このプロテアーゼを介して核内に伝達されたシグナルは、顆粒層細胞核内の中性Ca・Mgイオン依存性エンドヌクレアーゼのみを活性化してゲノムDNAをヌクレオソーム単位で切断することが分かった。併行して卵胞退行に伴って顆粒層細胞に特異的に発現するmRNAを検索した結果、インスリン様成長因子と血小板由来成長因子mRNAと塩基配列相同性の高いチロシンキナーゼ様蛋白をコードするmRNAが特異的に発現していることが分かった。これら顆粒層細胞アポトーシスの制御因子や細胞内シグナル伝達系をmRNA導入、抗体、阻害剤などにて人為的制御できる可能性が高まったことは当初予定していた以上の成果で、発生生物学全般にも貢献すると考える。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] 眞鍋昇ら: "Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic antral follicles in the pig ovaries" Experientia. 52. 647-651 (1996)
[Publications] 杉本実紀ら: "Follicle survival in neonatal rat ovaries cryopreserved by vitrification." Cryo Letter. 17. 93-98 (1996)
[Publications] 眞鍋昇ら: "Ca2+/Mg2+-Dependent endonuclease but not Ca2+-Dependent,Mg2+-Dependent or cation-independent endonuclease is involved in granulosa cell apoptosis of pig atretic follicles." Journal of Reproduction and Development. 42. 247-253 (1996)
[Publications] 眞鍋昇ら: "Effect of the mycelial extract of cultured cordyceps sinensis onin vivo hepatic energy metabolism in the mouse." Journal of Pharmacology. 70. 85-88 (1996)
[Publications] 森田眞紀ら: "Ultrastructural features of secretion by murine oviductal epithelium." Journal of Mammalian Ova Research. 14. 1-7 (1997)
[Publications] 奥田智彦ら: "Retinoic acid induces malformations related to cell deathin the developing mouse embryo." Journal of Reproduction and Development. 43. 43-54 (1997)
[Publications] 森田眞紀ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Changes in cell proliferation and morphology in murine oviductal epithelial during the estrous cycle." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)
[Publications] 眞鍋昇ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic Graafian follicles in the porcine ovaries." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)

1996 Fiscal Year Annual Research Report

卵胞退行における顆粒層細胞のアポトーシスの役割とその制御機構

Principal Investigator

眞鍋 昇 京都大学, 農学部, 助教授 (80243070)

Research Products

[Publications] 眞鍋 昇ら: "Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic antral follicles in the pig ovaries" Experientia. 52. 647-651 (1996)

[Publications] 杉本 実紀ら: "Follicle survival in neonatal rat ovaries cryopreserved by vitrification." Cryo Letter. 17. 93-98 (1996)

[Publications] 眞鍋 昇ら: "Ca2+/Mg2+-Dependent endonuclease but not Ca2+-Dependent,Mg2+-Dependent or cation-independent endonuclease is involved in granulosa cell apoptosis of pig atretic follicles." Journal of Reproduction and Development. 42. 247-253 (1996)

[Publications] 眞鍋 昇ら: "Effect of the mycelial extract of cultured cordyceps sinensis onin vivo hepatic energy metabolism in the mouse." Journal of Pharmacology. 70. 85-88 (1996)

[Publications] 森田 眞紀ら: "Ultrastructural features of secretion by murine oviductal epithelium." Journal of Mammalian Ova Research. 14. 1-7 (1997)

[Publications] 奥田 智彦ら: "Retinoic acid induces malformations related to cell deathin the developing mouse embryo." Journal of Reproduction and Development. 43. 43-54 (1997)

[Publications] 森田 眞紀ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Changes in cell proliferation and morphology in murine oviductal epithelial during the estrous cycle." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)

[Publications] 眞鍋 昇ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic Graafian follicles in the porcine ovaries." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)

眞鍋昇京都大学, 農学部, 助教授 (80243070)

[Publications] 眞鍋昇ら: "Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic antral follicles in the pig ovaries" Experientia. 52. 647-651 (1996)

[Publications] 杉本実紀ら: "Follicle survival in neonatal rat ovaries cryopreserved by vitrification." Cryo Letter. 17. 93-98 (1996)

[Publications] 眞鍋昇ら: "Ca2+/Mg2+-Dependent endonuclease but not Ca2+-Dependent,Mg2+-Dependent or cation-independent endonuclease is involved in granulosa cell apoptosis of pig atretic follicles." Journal of Reproduction and Development. 42. 247-253 (1996)

[Publications] 眞鍋昇ら: "Effect of the mycelial extract of cultured cordyceps sinensis onin vivo hepatic energy metabolism in the mouse." Journal of Pharmacology. 70. 85-88 (1996)

[Publications] 森田眞紀ら: "Ultrastructural features of secretion by murine oviductal epithelium." Journal of Mammalian Ova Research. 14. 1-7 (1997)

[Publications] 奥田智彦ら: "Retinoic acid induces malformations related to cell deathin the developing mouse embryo." Journal of Reproduction and Development. 43. 43-54 (1997)

[Publications] 森田眞紀ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Changes in cell proliferation and morphology in murine oviductal epithelial during the estrous cycle." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)

[Publications] 眞鍋昇ら: "Histochemistry and Cytochemistry : Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic Graafian follicles in the porcine ovaries." The Japan Society of Histochemistry and Cytochemistry Nakanishi Pr.Co.,Kyoto,Japan, 1122 (1996)