マイコプラズマの16S-23SrRNA遺伝子間スペーサーの解析とその応用

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07660398
• Research Institution: University of Tokyo
• Principal Investigator: 原澤 亮 東京大学, 医学部, 助教授 (70159101)
• Keywords: マイコプラズマ / リボソームRNA / スペーサー

Research Abstract

申請者はマイコプラズマの16S-23SrRNA遺伝子間スペーサー領域を標的として、あらゆる菌種の検出が可能な普遍的なPCRプライマーを開発してきた。昨年度はこのユニバーサル・プライマーを用いて、ヒトおよび動物由来のウレアプラズマ(尿素分解性マイコプラズマ)の16S-23SrRNA遺伝子間スペーサー領域をPCR法により増幅させ、アガロースゲル電気泳動装置により分画し、ゲルからDNA断片を回収した。さらに、このDNA断片をエタノール沈殿により精製した後、PCRに用いたユニバーサル・プライマーを再び用いて、哺乳動物由来のウレアプラズマ4菌種の16S-23SrRNA遺伝子間スペーサー領域の塩基配列をサンガー法により決定した。この研究により申請者はヒトを含む哺乳動物由来ウレアプラズマのすべてについて16S-23SrRNA遺伝子間スペーサー領域の塩基配列を手に入れたことになる。本年度は動物由来のマイコプラズマを対象に検索を広げた。塩基配列の解析は、パソコンを用いて行い、塩基配列のデータベースはCD-ROMを用いて検索した。その結果、マイコプラズマ菌種がその宿主であるヒトを含む動物種と共進化してきたことが示され、マイコプラズマと動物の宿主寄生体関係に新たな知見をもたらした。これは昨年度に行ったウレアプラズマについての解析結果を傍証するものであり、得られた成績が一層確かなことであると考えられた。すなわち、マイコプラズマは宿主特異性がきわめて強い微生物であり、宿主となる哺乳動物の系統進化から推定すると動物マイコプラズマの種の成立は中生代白亜紀にまで遡るものと思われた。これはマイコプラズマの系統進化を考えるうえで大きな成果である。

Research Products

• [Publications] Harasawa,R.: "Phylogenetic analysis of genes coding for 16S rRNA sequences in mammalian ureaplasmas." International Journal of Systematic Bacteriology. 46巻3号. 827-829 (1996)
• [Publications] Harasawa,R.: "Phylogenetic analysis of the 16S-23S rRNA intergenic spacer regions of the genus Ureaplasma." Journal of Veterinary Medical Science. 58巻3号. 191-195 (1996)
• [Publications] Harasawa,R.: "Phylogenetic analysis of pestivirus based on the 5′ untranslated region." Acta Virologia. 40. 49-54 (1996)
• [Publications] Sasaki,T.: "Evaluation of current sterility tests for human live viral vaccines." Biologicals. 24. 51-55 (1996)
• [Publications] Kojima,A.: "Detection of Mycoplasma DNA in Veterinar Live vaccines by the polymerase chain reaction." Journal of Veterinaty Medical Science. 58巻10号. 1045-1048 (1996)
• [Publications] 原澤 亮: "マイコプラズマの16S-23SrRNA遺伝子間スペーサー領域." 日本細菌学雑誌. 51巻2号. 583-588 (1996)
• [Publications] Harasawa,R.: "Molecular and Diagnostic Procedure in Mycoplasmology" Academic Press,New York, 466 (1996)