培養血管内皮細胞と血小板との相互作用に関する組織細胞化学的的研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07670032
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyorin University
• Principal Investigator: 川上 速人 杏林大学, 医学部, 助教授 (30146542)
• Keywords: 血小板 / 血管内皮細胞 / 複合糖質 / 癌細胞 / 転移 / レクチン / 細胞接着 / ツニカマイシン

Research Abstract

血小板と血管内皮細胞に癌細胞を加えた3者の相互作用について、in vitro培養系を用いて組織化学的に検討した。中でも特に、血小板と癌細胞との相互作用における複合糖質の関与について注目した。株化マウス肝類洞内皮(HSE)細胞をコートしたシャーレに、肝転移性colon26細胞を蒔き込み、マウスのヘパリン血より調製した多血小板血漿(PRP)存在下で、37℃、0〜30分間培養すると、colon26細胞は、まず血小板凝集塊を介して内皮細胞と間接的に接着し(約10分後)、次いで内皮細胞と直接接着するようになり(約30分後)、最終的には内皮細胞下へ浸潤した。また、レクチン染色性を検討すると、ECA(Erythrina crystagalli agglutinin)陽性のcolon26細胞はECA陰性の細胞より強く内皮細胞に接着していた。またこの接着反応は、ECAの特異的結合糖であるラクトースやN-アセチルラクトサミン添加により部分的に阻害された。一方、colocn26細胞と血小板とを混合培養して両者の反応性を検討すると、N-グリコシド結合型糖鎖の特異的合成阻害剤であるTunicamycin(0.5-5μg/ml)にて前処理したcolon26細胞では、血小板の接着性が有意に低下していた。また、Tunicamycinにて前処理したcolon26細胞をマウス脾臓に注入して肝転移の形成を検討すると、対照群に比し転移が有意に減少した。Colon26細胞の可溶化膜画分より、ECA-Sepharose結合性を有する分子量約130KDの糖蛋白が単離された。Tunicamycin処理したcolon26細胞ではこの糖蛋白が有意に減少しており、ECA結合性を有する多分岐複合型糖鎖を含んだN-グリコシド結合型糖鎖を有する糖蛋白であると推定される。130KD糖蛋白が、colon26細胞と血小板との接着に密接に関係し、その結果として肝類洞内皮細胞との接着、ひいては肝転移の成立につながっていく可能性が考えられる。

Research Products

• [Publications] Kawakami H: "Histochemical detection of sugar residues by joint use of specific antibodies and lectins." Acta Histochem Cytochem. 28. 191-192 (1995)
• [Publications] Aoki D: "Phenotypic alteration of carbohydrate antigens in gynecological malignancy." Acta Histochem Cytochem. 28. 193-201 (1995)
• [Publications] Kurosaki M: "Immunohistochemical localization of the glucose transporter GLUT1 in choroid plexus papillomas." Brain Tumor Pathol. 12. 69-73 (1995)
• [Publications] Kurosaki M: "Peanut agglutinin(PNA) binding to human prolactin-producing pituitary adenomas." Acta Neuropathol. 89. 475-482 (1995)
• [Publications] Fukushima H: "Immunocytochemical localization of estrogen and progesterone receptors (ER & PgR) in breast cancer." Okajimas Folia Anat Jpn. 71. 365-370 (1995)
• [Publications] Kudo A: "Use of semithin frozen sections to evaluate the co-localization of estrogen receptors and progesterone receptors in cells of breast cancer tissues." J Histochem Cytochem. 44(印刷中). (1996)
• [Publications] 川上速人: "組織細胞化学1995 「糖の組織化学--レクチン法」" 学際企画, 8 (1995)
• [Publications] 川上速人: "電子顕微鏡でみるミクロの世界-生物編「血小板」" 学際企画, 2 (1995)