神経細胞塩素イオンポンプATPアーゼの遺伝子構造と発現

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07670124
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 原 満良 関西医科大学, 医学部, 講師 (50192282)
• Keywords: 塩素イオンポンプ / ATPアーゼ / 神経細胞

Research Abstract

1.ラットおよびブタ脳より、分別遠心分離、EDTA・高塩濃度処理により、Cl^--ATPaseを多く含む膜分画を調整した。これを非イオン性界面活性剤 MEGA-10により可溶化し、MONO-Qカラムクロマトグラフィー、及び、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により、Cl^--ATPaseを部分精製した。
2.Cl^--ATPaseは、分子量約500kDaの酸性蛋白であり、高マンノース型糖鎖を結合しているものと考えられる。SDS-PAGEの結果より、主要サブユニットとして、97、64、60、および47kDaのペプチドを同定した。
3.これをウサギに免疫し、酵素活性を部分的に阻害する抗体を得た。この抗体は、60kDaのサブユニットに結合するものであった。
4.上記の結果得られたCl^--ATPaseの主要サブユニットそれぞれについて、N末端アミノ酸配列分析を試みたところ、いずれもいわゆるNブロックの状態であった。
5.以上の結果は、第68回および第69回日本薬理学会総会、第87回日本薬理学会近畿部会、および第15回国際神経化学会議に発表済または発表予定である。

Research Products

• [Publications] Yasukura T. et al.: "Adrenergic receptor-mediated Cl^- transport in rabbit corneal endothelial cells." Jpn. J. Pharmacol.67. 315-320 (1995)
• [Publications] Mikami Y. etbal.: "Artial natriuretic peptide stimulates Cl transport in retinal pigment epithelial cells." Curr. Eye Res.14. 391-397 (1995)
• [Publications] Hara M. et al.: "Molecular characteristics of hog brain Cl^--ATPase." J. Neurochem.65. S180- (1995)
• [Publications] Inagaki C. et al.: "Characteristics of rat brain chloride-stimulated adenosine triphosphatase as an active chloride extrusion" J. Neurochem.65. S180- (1995)
• [Publications] Irie T. et al.: "The mechanism of ammonia-induced increase in Cl^- concentration in rat cultured hippocampal neurons." Jpn. J. Pharmacol.67. 37- (1995)
• [Publications] Zeng X-T. et al.: "Cl^- pump in rat brain" Jpn. J. Pharmacol.67. 308- (1995)