1995 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトおよびマウスの極長鎖脂肪酸アシルCoA脱水素酵素ゲノムDNAのクローニング
Project/Area Number |
07670166
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Research Institution | Shinshu University |
Principal Investigator |
青山 俊文 信州大学, 医学部, 助教授 (50231105)
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Keywords | 極長鎖脂肪酸アシルCoA脱水素酵素 / 脂肪酸β酸化 / ミトコンドリア / スプライシング異常 / マッピング / エンハンサー / イントロン / エクソンスキッピング |
Research Abstract |
ヒト極長鎖脂肪酸アシルCoA脱水素酵素(VLCAD)ゲノムDNAは入EMBL3ライブラリーから単離され,11kbのクローンが単離された。このうちコ-デング部分は5.4kbにわたり,20個のエクソンで構成されていた。このようにイントロンの短かいゲノムDNAは非常に珍しく,類例があまりない。マウスVLCADゲノムDNAも同様に単離され構造が決定されたが,ヒトの場合と同様に20個のエクソンから構成され,コーディング部分の長さは5.2kbであった。従って,両者は構造的に高い類似性を示した。 VLCAD欠損患者のゲノムDNA解析を4名について行った。2名はイントロン11の5′スプライスサイトのGTがATに変更しており,このためエクソン11がスキップされるスプライス異常であった。1名はイントロン5の3′スプライスサイトのAGのGがdeleteされており,このためエクソン6がスキップされていた。他の1名はエクソン15の3′末端のGがAに変更しており,このためエクソン15とエクソン17のはじめの4ヌクレオチドがスキップされる,非常に珍しい,非連続エクソンスキッピングであった。非常に高い頻度でエクソンスキッピングがおこるのはゲノムDNAの構造的特色に基づくためと考えられる。 ヒトVLCADゲノムの5′上流域を検索したところ,開始メチオニンの上流60bにプロモーターが存在し,上流約350bの所にSp1様のエンハンサーが存在し,CATアッセイによりエンハンサー作用を確定した。 FISH法によりマッピングを行ったところ,VLCADゲノムDNAは17p13に局在していた。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Toshifumi Aoyama: "Burification of Human VLCAD and Characterigation of Its Deficienay in Seven Patients" J. Clin. Invest.95. 2465-2473 (1995)
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[Publications] Toshifumi Aoyama: "Cloning of Human VLCAD and Molecular Characterigation of Its Deficienay in two Patients" Am. J. Hum. Genet. 57. 273-283 (1995)
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[Publications] Koji O.Orii: "Grmomic DNA Organigation of Human Mitochondrial VLCAD and Mutation Anolpis" Biochom. Biophys. Res. Commun.217. 987-992 (1995)
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[Publications] Masayoshi Souri: "Mutation Anahysis of VLCAD Deficienay: Identification and Chorocterigation of Mutant VLCAD DNAs from Four Patients" Am. J. Hum. Genet. 58. 97-106 (1996)
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[Publications] Toshifumi Aoyama: "A“G"to“A" Mutation at Position -1 of a 5′Splice Site in Mitochondrial VLCAD gene Results in 2 Nonseguential Deletions" Am. J. Hum. Genet. (in press).