ローリングサークル型複製伸長を担うEBウイルス複製装置の分子解剖

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07670341
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 鶴見 達也 名古屋大学, 医学部, 助教授 (90172072)
• Keywords: Epstein-Barr ウイルス / DNA ポリメラーゼ / 一本鎖DNA結合蛋白質

Research Abstract

Epstein-Barrウイスル産生時においてウイルスゲノムはローリングサークル型複製様式によって複製される。このDNA鎖伸長に関わるウイルス蛋白質はDNAポリメラーゼ複合体,一体鎖DNA結合蛋白質,DNAヘリカーゼ/プライマーゼである。平成7年度においてはEBVSSB(EBV-本鎖DNA結合蛋白質)をウイルス産生細胞により精製しその生化学的性質及びEBV DNAポリメラーゼとの相互作用について検討した。
(1)EBVSSBはBALF2遺伝子がコードすることが知られている。EBVB95-8株よりゲノムDNAを調整しBALF2 ORFをクローニングし大腸菌で発現精製後ウサギに免疫し抗EBVSSB抗体を得た。
(2)EBVウイルス産生状態を誘導したB95-8細胞核抽出液から抗EBVSSB抗体を用いたウエスタン法で各種カラムを通してEBVSSBを精製した。精製されたBALF2蛋白質は分子量130Kでありゲル濾過の解析から溶液中ではmonomerとして存在することが示唆された。
(3)EBVSSBは二本鎖DNAよりも一本鎖DNAに優先的に結合することがcompetitive filter binding assayから明らかになった。
(4)Singly primed M13ssDNAを用いたEBV DNAポリメラーゼアッセイ系にBALF2蛋白質を添加する系においてEBVSSBはBALF5ポリメラーゼcatalyticサブユニットのprocessivityを著しく促進させた。

Research Products

• [Publications] Daikoku,T.: "The US3 protein kinase of herpes simplex virus type 2 in associated with phosphorylation of the UL12 alkaline nuclease in vitro." Archives of Virology. 140. 1637-1644 (1995)
• [Publications] 鶴見達也: "単純ヘルペスウイルスのDNA複製" 共立出版(株)生命科学を推進する分子ウイルス学. 187-199 (1995)