1995 Fiscal Year Annual Research Report
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07670510
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Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
秋山 和子 久留米大学, 医学部, 講師 (40080634)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 博司 久留米大学, 医学部, 教授 (20112039)
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| Keywords | ムチンコア蛋白 / ヒト唾液ムチン / 唾液特異性 / 血液型活性ムチン / 脱糖ムチン |
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| Research Abstract |
ヒト唾液からP4-5Cモノクローナル抗体(ヒト唾液ムチンに特異性を示す)に反応するムチン糖蛋白の分離精製を行った。30分間煮沸した唾液の遠心上清に2倍量のエタノールを加えて得られた沈殿を出発物質とした。これをシアリダーゼで消化した後、常法に従って還元・カルボキシメチル化した。次いで、2M尿素中でトリプシン消化を行い消化物をSuperose6カラム(FPLC装置、6M-塩酸グァニジン溶液を使用)で分画した。素通りして溶出される分画をムチン糖蛋白(B-T-1)として集めた。B-T-1のSDS-PAGE(10%ゲル)像は、P4-5Cに陽性、クマシ-青蛋白染色には陰性であり、且つアルシアン青糖染色には陽性を示した。このことからB-T-1は今回の目的に叶う高分子ムチン糖蛋白であると判定した。B-T-1の糖鎖及びコア蛋白部分とP4-5Cとの反応性、ムチンコア蛋白構造の解明を目的に、B-T-1の脱糖を試みた。脱糖処理条件を検討した結果、TFMSを用い0℃、4時間の反応、必要に応じて再度TFMSを作用させる事でほぼ脱糖していると考えられる成績を得た。脱糖処理B-T-1(DG-ムチン)はSDS・PAGE(10%ゲル)で明かにクマシ-青に染色する分子量13万、7万と推定される蛋白を保有していることを認めた。しかし、両蛋白バンドは、非還元状態でのSDS・PAGEでは様子を異にすることも認めている。
DG-ムチンの精製をSuperose6カラム、6M-塩酸グアニジン溶液中で試みたが、分離・収量いずれも満足な結果が得られなかった。DG-ムチンはムチン糖蛋白のコア部分と考えて差し支えないと判断できるので、DG-ムチンを酵素的に又は科学的に切断し、その断片を分離・分析して、構造の解明をしたいと考慮中である。
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