1996 Fiscal Year Annual Research Report
慢性炎症性疾患の病因としての細菌感染関与の有無についての研究
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07670512
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| Research Institution | HOKKAIDO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
向井 正也 北海道大学, 医学部・附属病院, 助手 (50261293)
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| Keywords | 慢性関節リウマチ / in situ PCR / 細菌感染 / 16srRNA / 細胞内細菌生存 / 慢性肉芽腫性疾患 |
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| Research Abstract |
慢性関節リウマチ(RA)を含む慢性肉芽腫性疾患の原因は未だに不明である。しかし、agaractosyl IgGが非定型抗酸菌症やRAで認められるが全身性エリテマトーデスなどの他の自己免疫疾患では認められない、RAではLyme病や反応性関節炎と同様にヘルパーT細胞の反応がTh1優位であるなど、細菌感染がRA発症に関与するとの傍証は多数存在するが、細菌そのものを証明した研究はない。
最近,16srRNAから作成された細菌に共通のprimerを用いてpolymerase chain reaction (PCR)を行い、培養が不可能な細菌の同定が可能となり、環境学の分野で成果が上がっている。しかし、臨床材料では混入してくる細菌が非特異的反応を引き起こすことが問題となる。この点、組織や細胞中でPCRを行うin situ PCRでは、混入する細菌DNAを洗浄することができる。今回、この方法と共通なprimerを用いてRAなどの発症または進展に細菌感染が関与するかについて検討した。
RA関節液中の浮遊細胞を用いた検討では、19関節中1関節に細菌DNAを認めた。この方法の感度が不明のため、陰性検体の評価が問題となった。しかし、細菌DNAを認めた検体を一検体にしろ認めたことは、RAに細菌感染が関与している一つの傍証とも考えられた。組織を用いた検討では、in situ PCRの欠点として、増幅されるDNAに直接標識核酸を取り込ませると非特異的反応を生じるというものがある。このため、mRNAからcDNAを作成するreverse trascriptase in situ PCRを行った。この方法を細菌に共通のprimerで行うことは十分に確立していなかったが、ほぼ確立できた。しかし、方法の確立に時間を要したため、コントロールを含めた多数の臨床材料の検討は十分に行えておらず、現在検討中である。
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[Publications] Steinman C. R.: "Domain directed PCR capable of distinguishing bacterial from host DNA at the single cell level : Characterization of a systematic method to investigate putative bacterial infection in idiopathic disease." Analytical Biochemistry. 244. 328-339 (1997)
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[Publications] Akito Tsutsumi: "Antibodies to b2 glycoprotein I and clinical manifestations in patients with systemic lupus erythematosus." Arthritis & Rheumatism. 39. 1466-1474 (1996)
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[Publications] 向井正也: "In situ PCR :その応用と問題点。" 日本臨床免疫学会会誌. 19. 15-26 (1996)
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[Publications] 向井正也: "SLEの臨床:自己抗体の多様性。" 病理と臨床. 14. 741-747 (1996)
