1995 Fiscal Year Annual Research Report

慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究

Research Project

Project/Area Number	07670517
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	布井博幸東京大学, 医科学研究所, 助手 (50218260)
Keywords	慢性肉芽腫症 / 遺伝子治療 / Retrovirus Vector
Research Abstract	我々慢性肉芽腫症患者で欠損しているNADPH oxidaseの各構成蛋白について研究しており、モノクローナル抗体作成、無細胞系での活性測定、患者病型分類や遺伝子解析など臨床的な調査を行ってきた。また同時に遺伝子治療の基礎的研究として、アデノウイルス、レトロウイルス等の試みをしてきた. 今回,癌化学療法センター杉本芳一博士と共同研究で、in vivo selectionが唯一可能な多剤耐性遺伝子であるMDR1とIRES (Internal Ribosomal Entry Site)を組み込んだbicistronicなpHa-MDR Retrovirus vectorにgp91-phox,p47-phox,P67-phox cDNAを組み込んだ。作成した各plamidをPA317packaging cellへtransfectして、vincristineで耐性になった細胞をクローニングし,さらにこの細胞培養上清を3T3 cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSやWester blottingで確認した。各構成蛋白を発現しているウイルス産生PA317細胞をクローニングし、その培養上清のウイルスタイタ-を3T3 cellで測定し3-5x10^4pfu/ml程度のウイルス産生を確認した。この培養上清を患者抹消血から樹立したEB virus established B cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSまたはWestern Blottingで確認すると同時にgp91-およびp47-phox導入細胞では活性酸素産生の再構築が得られた. 今後、マウスを用いてこのウイルスベクターの有用性と安全性を確認していこうとしている

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Kobayashi.S Nunoi.H etal: "Characterization of superoxide-generating system in human peripheral lymphocytes and lymphoid cell lines." J.Biochem. 117. 758-765 (1995)
[Publications] Nunoi.H Iwata.M etal: "AG dinucleotide insertion in a patient with chronic granulomatous disease lacking cytosolic 67-kDa protein." Blood. 86. 329-333 (1995)
[Publications] Azuma.H Nunoi.H, etal: "A new mutation in exon 12 of the gp91-phox gene leading to cytochrome b-positive X-linked chronic granulomatous disease." Blood. 86. 3274-3277 (1995)
[Publications] Saiki.O Nunoi.H,et al: "Signaling through CD40 rescues IgE but not IgG or IgA secretion in X-linked immunodeficiency with hyper-IgM." J.Clin,Invest.95. 510-514 (1995)
[Publications] Shinagawa.T Nunoi.H,et al: "Induction of CD40 in Promyelocytic HL60 Cells Cultured with Retinoic acid/or Various Cytokines." J.Biochem. 118. 534-540 (1995)
[Publications] Miyamoto.D Nunoi.H: "Analysis of the NADPH oxidase components during differentiation of HL-60 cells to eosinophilic lineage." Biochem.Biophys Acta. 1224. 11-16 (1994)
[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "羊土社実験医学(GTP結合蛋白質)" 食細胞におけるRacとNADPHオキシダーゼ. 2 (1995)
[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "最新医学社臨床遺伝子学'95" 慢性肉芽腫症の分子病態と遺伝子治療. 9 (1995)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究

Principal Investigator

布井 博幸 東京大学, 医科学研究所, 助手 (50218260)

Research Products

[Publications] Kobayashi.S Nunoi.H etal: "Characterization of superoxide-generating system in human peripheral lymphocytes and lymphoid cell lines." J.Biochem. 117. 758-765 (1995)

[Publications] Nunoi.H Iwata.M etal: "AG dinucleotide insertion in a patient with chronic granulomatous disease lacking cytosolic 67-kDa protein." Blood. 86. 329-333 (1995)

[Publications] Azuma.H Nunoi.H, etal: "A new mutation in exon 12 of the gp91-phox gene leading to cytochrome b-positive X-linked chronic granulomatous disease." Blood. 86. 3274-3277 (1995)

[Publications] Saiki.O Nunoi.H,et al: "Signaling through CD40 rescues IgE but not IgG or IgA secretion in X-linked immunodeficiency with hyper-IgM." J.Clin,Invest.95. 510-514 (1995)

[Publications] Shinagawa.T Nunoi.H,et al: "Induction of CD40 in Promyelocytic HL60 Cells Cultured with Retinoic acid/or Various Cytokines." J.Biochem. 118. 534-540 (1995)

[Publications] Miyamoto.D Nunoi.H: "Analysis of the NADPH oxidase components during differentiation of HL-60 cells to eosinophilic lineage." Biochem.Biophys Acta. 1224. 11-16 (1994)

[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "羊土社 実験医学(GTP結合蛋白質)" 食細胞におけるRacとNADPHオキシダーゼ. 2 (1995)

[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "最新医学社 臨床遺伝子学'95" 慢性肉芽腫症の分子病態と遺伝子治療. 9 (1995)

布井博幸東京大学, 医科学研究所, 助手 (50218260)

[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "羊土社実験医学(GTP結合蛋白質)" 食細胞におけるRacとNADPHオキシダーゼ. 2 (1995)

[Publications] 布井博幸、金ケ崎士朗: "最新医学社臨床遺伝子学'95" 慢性肉芽腫症の分子病態と遺伝子治療. 9 (1995)