進行性筋ジストロフィーの遺伝子治療にむけての臨床的基礎的研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07670906
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 斎藤 加代子 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (90138834)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 近藤 恵里 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (40281406) ; 池谷 紀代子 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (70151313)
• Keywords: Duchenne型筋ジストロフィー / 転写産物 / 遺伝子産物 / Sequence / 骨格筋細胞培養 / アデノウイルスベクター

Research Abstract

1)Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)とBecker型筋ジストロフィー(BMD)における遺伝子変異、転写産物、遺伝子産物、臨床との関係を解析し、生検骨格筋、リンパ球におけるジストロフィンmRNAを解析した。
骨格筋より、AGPC法によってRNAを単離し、リンパ球DNAにおける遺伝子欠失領域をはさむプライマーを設計し、RT-PCRを行った。得られたPCR産物は全例sequenceして欠失の境界を調べた。また、リンパ球mRNAも検討した。その結果、DMD11例、BMD5例では遺伝子欠失をはさむ領域とその上流のmRNAは存在した。そのうちDMD5例では下流のmRNAは同定されなかった。欠失をはさむ領域の転写産物を認めなかったDMDの1例では上流、下流にもmRNAは同定されなかった。sequenceの結果、1例ではリンパ球DNAにてエクソン48-52の欠失が認められたが、エクソン48の3′端の15塩基のエクソン内欠失に引き続き、エクソン49-52の欠失、CのAへのmissense mutationを認めた。別の1例ではリンパ球DNAと骨格筋mRNAはエクソン45の欠失を示したが、リンパ球mRNAは2種類のサイズのPCR産物を示し、小さいのPCR産物のdirect sequencingを行ったところ、エクソン45-48の欠失を示していた。
2)DMD患者の筋生検時に得られた骨格筋細胞を培養し、筋細胞クローンを樹立した。線維芽細胞、筋線維間結合織細胞も一次培養して凍結保存した。
3)アデノウイルスベクターにβ-galactosidase遺伝子を組み換え、293細胞にて増殖させている。

Research Products

• [Publications] 斎藤加代子: "進行性筋ジストロフィー" 治療. 78. 2161-2166 (1996)
• [Publications] 斎藤加代子: "福山型筋ジストロフィー" 発達障害研究. 18. 122-127 (1996)
• [Publications] Eri.Kondo: "Prenatal diagnosis of Fukuyama type congenital muscular dystrophy by polymorphism analysis" Am J Med Genet. 66. 169-174 (1996)
• [Publications] Tatsushi Toda: "Linkage-disequilibrium mapping narrows the Fukuyama-type congenital muscular dystrophy candidate region to <100kb" Am J Hum Genet. 59. 1313-1320 (1996)
• [Publications] Eri Kondo: "Gene localization of ambulant Fukuyama type congenital muscular dystrophy" Human Genetics. (印刷中).
• [Publications] Eri Kondo: "Reconfirmation of the Fukuyama type congenital muscular dystrophy gene locus at chromosome 9q31 and a successful pronetal diagnosis" Brain Dev. (印刷中).
• [Publications] Kayoko Saito: "Brain Dev" Mild form of Walker-Warburg Syndrome(印刷中),