1996 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトにおける甲状腺ホルモン応答性遺伝子のクローニング:甲状腺ホルモン不応症の発症機構解明に向けて
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07671125
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
村田 善晴 名古屋大学, 環境医学研究所, 助教授 (80174308)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長屋 敬 名古屋大学, 環境医学研究所, 助手 (80262913)
神部 福司 名古屋大学, 環境医学研究所, 助手 (00211871)
妹尾 久雄 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (40135380)
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| Keywords | 甲状腺ホルモン / クローニング / ヒト / 線維芽細胞 |
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| Research Abstract |
我々は、mRNAのdifferential displayという技法を用いて、ヒト皮膚線維芽細胞における甲状腺ホルモン応答性遺伝子,ZAKI-4のクローニングに成功した。そして、平成7年度の研究においてトリヨードサイロニン(T3)の添加によりZAKI-4mRNAの発現は、12時間以内に濃度依存性に増加することや、ZAKI-4mRNAは脳、心臓、肝、骨格筋でも発現することを示した。また、ZAKI-4cDNAの全長のクローニングに成功し、ZAKI-4蛋白の一次構造を明らかにした。そこで、平成8年度は、(1)T3によるZAKI-4mRNAの増加が如何なる機序で発現するか、(2)甲状腺ホルモン不応症患者から得られた線維芽細胞ではT3は如何にZAKI-4mRNAの発現を調節しているかを明らかにし、さらに(3)ZAKI-4遺伝子の調節領域のクローニングによりその塩基配列を解析することを目的とした。その結果、線維芽細胞に於いてT3添加によりZAKI-4の転写が促進され、ZAKI-4mRNAが増加することがが示されたが、その転写の促進にはde novoの蛋白合成が必要であることが明らかとなった。また、β型のT3受容体遺伝子を欠失した甲状腺ホルモン不応症患者から得られた線維芽細胞でもT3はZAKI-4mRNAを健常人の線維芽細胞とほぼ同様に増加したことから、ZAKI-4mRNAの発現に関してはα型の受容体のみでも調節され得ることが示された。一方、promoter finder^<TM>によりZAKI-4遺伝子の転写開始点の上流約2kbのクローニングにも成功し、その塩基配列を決定した。
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[Publications] T.Miyazaki: "Molecular cloning of a novel thyroid hormone-responsive gene,ZAKI-4,in human skin fibroblasts." Journal of Biological Chemistry. 271(24). 14567-14571 (1996)
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[Publications] T.Miyazaki: "Molecular cloning of rat ZAKI-4 gene." Environmental Medicine. 40(1). 13-16 (1996)
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[Publications] RE.Weiss: "Dominant inheritance of resistance to thyroid hormone not linked to defects in the thyroid hormone receptors a or β genes maby be due to a defective co-factor." Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 81(12). 4196-4203 (1996)
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[Publications] Y.Hayashi: "Molecular cloning of novel cDNAs containing CAG repeats by rapid amplification of 3'-cDNA ends." Environmental Medicine. 40(1). 35-38 (1996)
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[Publications] S.Yamaguchi: "Hepatocytes cultured in monolayers have a lower responsiveness to thyroid hormone and retinoic acid than do hepatocytes cultured in spheroids : Possible role of retinoid X receptor." Environmental Medicine. 40(1). 47-50 (1996)
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[Publications] T.Miyazaki: "A novel mutation (E358K) in the α-galactosidase A gene detected in a Japanese Family with Fabry disease." Human Mutation. 9(印刷中). (1996)
