副腎皮質腫瘍の特異的ホルモン産生に関わる転写因子に関する研究

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07671298
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 舟橋 啓臣 名古屋大学, 医学部, 講師 (50135357)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 諸橋 憲一郎 九州大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (30183114) ; 今井 常夫 名古屋大学, 医学部, 助手 (80252245) ; 妹尾 久雄 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (40135380) ; 高木 弘 名古屋大学, 医学部, 教授 (70154755)
• Keywords: 転写因子 / 副腎皮質 / ACTH / ステロイド合成

Research Abstract

(1)副腎皮質腫瘍におけるAd4BP、NGFI-B、COUP-TFなどの転写因子発現の検討
凍結保存された副腎皮質腫瘍組織を腫瘍部及び非腫瘍部に分け、RNAを抽出し、ノーザンブロット法をおこなった。クッシング症候群患者ではAd4BP mRNAは非腫瘍部及び腫瘍部で同じバンドの濃さで認められ、NGFI-B mRNAは非腫瘍部で腫瘍部よりも濃いバンドとして認められた。
(2)ラットを用いたAd4BP、NGFI-B、COUP-TFなどの転写因子発現調節の検討
これまで、内因性ACTH分泌をデキサメサゾン投与により完全に抑制したラットを用い、ACTH投与によりステロイド合成酵素の転写因子であるAd4BP、NGFI-B、COUP-TF遺伝子の発現調節を検討してきた。Ad4BP,COUP-TFはACTH投与前後でその遺伝子発現は変らなかったが、NGFI-B mRNAは30分後から増加C群、60分をピークとして漸減した。次に、転写因子の活性の変動を検討するために、ゲルシフトアッセイをおこなった。まず、それぞれのオリゴヌクレオチドを作成し、in vitro translationによりタンパク質を合成し、それらを反応させた後、アクリルゲルに電気泳動した。目的とする転写因子が結合することを確かめるためAd4BP,COUP-TFの抗体を反応させた後ゲルシフトアッセイを行った。抗体を反応させることにより、Ad4BPのバンドはスーパーシフトし、COUP-TFバンドは、消失し、ゲルシフトで出現するバンドが目的とするものであることが確かめられた。

Research Products

• [Publications] 森田孝子: "ラット副腎皮質における転写調節因子(Ad4BP,NGFI-B,COUP-TF)の遺伝子発現:ACTHによる調節" 名古屋大学環境医学研究所年報. XLVI. 120-122 (1995)
• [Publications] 今井常夫: "内分泌腺腫瘍におけるClonalityの検討-MAOAマイクロサテライトにおける蛍光プライマーを用いた解析" 名古屋大学環境医学研究所年報. XLVI. 123-126 (1995)
• [Publications] Takako Morita: "Adrenocorticotropic Hormone(ACTH)Increases the Expression of Its Own Recepter Gene" Endocrine Journal. 42. 475-480 (1995)
• [Publications] 森田孝子: "副腎皮質ステロイド合成酵素遺伝子発現に関わる転写因子(Ad4BP,COUP-TF)のDNA結合能の検討" 名古屋大学環境医学研究所年報. (印刷中). (1996)